求助:关于STZ造糖尿病大鼠模型

刘*涛

各位好，我是一名研究生，正在做实验，用STZ造糖尿病大鼠模型。用的是SD大鼠8只，体重130-150g之间的，腹腔注射，剂量为50mg/Kg，今天是注射后第三天，结果这三天内所有大鼠都没有出现多饮多吃多尿的现象，相反，吃的喝的好象比打药前更少了。大鼠注射后血糖未测。STZ溶液是注射前5分钟现配的，sigma公司的，大鼠饲料是常规鼠粮。请问各位，这是什么原因啊？小弟急切的等待答案。

y****a

我觉得你光用STZ恐怕不行啊，再加高热量的食物试试
STZ 诱发糖尿病动物模型的原理
STZ对一定种属动物的胰岛β细胞有选择性破坏作用，能诱发许多动物产生糖尿病，一般采用大鼠和小鼠制造动物模型。国外有学者报道选用雄性大鼠制造模型的成模率明显高于雌性大鼠。1型糖尿病与2型糖尿病动物模型的制备与STZ注射的剂量有关系：大剂量注射时，由于直接引起胰岛β细胞的广泛破坏，可造成1型糖尿病模型；而注射较少量STZ时，由于只是破坏一部分胰岛β细胞的功能，造成外周组织对胰岛素不敏感，同时给予高热量饲料喂养，两者结合便诱导出病理、生理改变都接近于人类2型糖尿病的动物模型。

造膜前的喂养
Ⅰ型糖尿病模型成模比较快，通常大鼠在普通饲料适应性喂养2周后即可开始造模
Ⅱ型糖尿病模型：高脂饮食诱导加小剂量STZ。造模前喂以高脂(高糖)饲料，诱发出胰岛素反抗。

高脂(高糖)饲料
高脂(高糖)饲料成分：其中含10%蔗糖，10%猪油，5%胆固醇
由基础鼠饲料加蔗糖、炼猪油和蛋黄按比搭配制作高脂高糖饲料：其比例为猪油18 % ,蔗糖20 % ,蛋黄3 % ,基础饲料59 %。

预实验的重要性
很重要。实验时STZ的给药量应参照预实验的结果，尽量不要盲目按照文献上或他人的给药量来直接使用，鼠均重和空腹(低糖状态)抗药力、禁食时长、注射选时、以及之前饲养过程、测糖选时等都不相同，通过预实验来确定符合自己实验鼠的给药计量，才是最科学的。

常用给药剂量
Ⅰ型糖尿病模型：大鼠剂量为70～65mg/Kg
Ⅱ型糖尿病模型：高糖高脂喂养1～2 个月的大鼠,STZ 剂量在25～40mg/Kg
或参考文献（鼠均重不同，本剂量以200克均重为例）。

配置STZ液
柠檬酸缓冲液的配制： 柠 檬 酸(FW:210.14) 2.1g加入双蒸水100mL中配成A液 柠檬酸钠(FW:294.10)2.94g加入双蒸水100mL中配成B液
链脲佐菌素配制液：用时将A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），PH计测定ph值,调节ph=4.2-4.5,即是所需配置STZ的柠檬酸缓冲液。
注射时用柠檬酸缓冲液以1%的浓度溶解STZ，按空腹体重注射相应的STZ， 在30分钟内注射完毕。★ STZ轻易失活, STZ快速称取后仍要求干燥避光，推荐用干燥铝箔(或锡箔)纸。

能否使用其他溶液配置缓冲液
可以。但我们推荐使用柠檬酸。例如用醋酸等溶液，也可以做出，但其PH值不好控制，而STZ只有在PH4.2-4.5的时候才具有最佳药力活性。

禁食和血糖的联系
禁食12小时以上(一般过夜禁食，不禁水)。禁食的时间越长，STZ对胰岛β细胞的破坏力越明显，即药效越高。所以相对禁食时间延长，可以降低STZ的用量。
腹腔注射和尾部注射的区别
尾部注射即静脉注射，药物利用率较高，同比腹腔注射，可以节省药量，缺点是操作起来不如腹腔注射方便。

注射前有那些操作步骤？
过夜禁食后称重，按大鼠总重量比称取STZ，放一干燥灭菌瓶内，外用锡纸包好，将柠檬酸缓冲液及装STZ的瓶子置冰浴，一起带到动物房，假如注射操作技术不熟练,应两组交替注射，建议分组溶解STZ，比如10只或15只鼠/组。

注射时，推进速度和血糖的关系
推注的速度快，更轻易形成高血糖，推注的速度慢，相对的危险性较低，但也不轻易成模，常规操作中多要求快速注射。当然，STZ的剂量是决定血糖高低的主要因素。

死鼠问题的解决
鼠的个体差别和空腹(低血糖)反抗力的差异而致死亡率的不同，开始死亡率高可能主要是血糖忽然升高,鼠不适应,或发生了DKA(即酮症酸中毒)。
首先，一定要保证足够的饮水量(饮水量不足轻易导致死鼠);
其次，高血糖和低血糖都会造成死鼠，避免死鼠可以通过注射胰岛素或暂时补糖，两种途径： 1、常见为血糖过高。补胰岛素法，补一些中效胰岛素。例如给诺和灵n或NPH(中性鱼精蛋白锌胰岛素),每次2--3个单位,过了3-5天，大鼠一般死亡率就低了；2、补糖法，禁食后的鼠，注射的时候已经处于低血糖状态，造模4小时后腹腔注射百分之20的葡萄糖，可避免因注射时血糖过低死鼠;
再次，防止动物自相残杀。食物缺乏和供水不足的情况下，会互相撕杀、啃食同类,所以食物和饮水要供给充足,最好是两路供给;
最后，防止感染。糖尿病大鼠尿量多，垫料潮湿，需要勤换垫料，所以糖尿病大鼠较其他大鼠轻易出现感染，非凡是泌尿道感染和腹腔感染。腹腔注射、皮下注射及采血测血糖等侵入性操作前后，要注重消毒工作。如每次采血测血糖后可用四环素(或金霉素眼药膏)局部涂抹处理伤口预防感染。
模型不达标者，三天后补注STZ(以10mg-20mg/kg体重剂量腹腔注射)，也很轻易成模，或让血糖恢复正常后再常规剂量注射;但要达到理想的效果，往往是恢复到正常状态下重新造模。

希望对你有所帮助