黄酮的测定方法

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本人花大量时间总结的有关总黄酮含量测定的一些方法，列举并探讨如下，欢迎大家进一步深入讨论。
一．***－硝酸铝－氢氧化钠比色法
该方法是目前应用最广泛的总黄酮含量测定方法，该法的原理是在待测物的水溶液中，加入***－硝酸铝－氢氧化钠试液，铝离子与黄酮类化合物3，，4，二羟基发生络合反应显色来进行测定。例如芦丁化合物B环上有邻二酚羟基，与铝离子络合，在500nm处有最大吸收，如果供试品显色后在同一地方有最大吸收，即可以芦丁做对照品，用比色法进行测定。芦丁为黄酮类成分，由于很容易得到对照品，很多文献报道某些中药或中药制剂中都沿用以芦丁为对照品的比色法测定总黄酮含量。2005年版中国药典用改方法对一味胶囊、益心酮片、消咳喘糖浆及排石颗粒进行了总黄酮的含量测定。
用此方法进行总黄酮的含量测定影响因素很多，其一，某些具有邻二酚羟基类化合物也会和铝离子络合显色，例如含多羟基的酚酸、有机酸类化合物，如咖啡酸、绿原酸等；其二，某些黄酮类成分与铝离子络合，不在500nm处有最大吸收，影响测定结果，使测定结果偏小，例如刺槐素苷、黄芩素、山柰酚等；其三，某些总黄酮类化合物中不含或仅含有少量芦丁，但是很多研究者仍然用芦丁做对照品测定总黄酮含量，如果待测总黄酮类某些成分分子量与芦丁分子量相差很多，或者该组分中大部分是苷元，则测定结果与实际总黄酮含量会有差别，不能准确定量。因此用***－硝酸铝－氢氧化钠对成分不明确的待测物进行含量测定，结果不准确，该方法用做总黄酮含量测定专属性不强。建议大家应用的时候慎重考虑。
针对以上测定方法弊端，有人在该方法的基础上稍有改动，测定总黄酮含量。例如，
二、紫外分光光度法
黄酮类化合物由于均具有α－苯基色原酮的基本结构，羰基与二个芳香环形成两个较强的共轭系统，对紫外光区相应有两个区域的特征吸收。吸收带I在较长波长（330～380nm）；吸收带II在较短波长（240～280nm）。经分离纯化的待测样品中主要含有黄酮类成分，其紫外光谱中有两个特征吸收带，因此可以选用其中主要的黄酮成分作为对照品测定总黄酮含量，例如2005版中国药典，淫羊藿中总黄酮的含量测定就是采用淫羊藿苷为对照品在270nm处测定淫羊藿总黄酮含量。
本人认为用紫外分光光度法测定总黄酮含量时应注意，（1）对照品应是有待测物中含有的成分；（2）对照品的分子量应适中、在待测物中含量较高；（3）对照品的吸收曲线与待测物的吸收曲线相似、最大吸收波长相同；（4）应加强样品的前处理，合理选择阴性样品，尽可能排除其他组分的干扰。
三、高效液相色谱法
如果待测物中，总黄酮的大多数成分明确、含量高、易得到可供含量测定用的对照品，则可用高效液相色谱法直接测定总黄酮的含量或者样品经过处理，测定指标成分含量，再换算成总黄酮含量。
欧来良等人用高效液相色谱法测定沙棘中总黄酮含量，因沙棘黄酮中几类苷元的分子在结构上极为相似, 只是少数非强生色基团不同, 而且相对分子质量也相差不多。因而它们对槲皮素的响应因子都应该接近1, 即只用槲皮素作为对照, 测定槲皮素含量，再转换成总黄酮含量。该方法产生的误差小，待测物总黄酮成分母核相同，均可采用该方法测定。
四、其他测定方法
除了常用的几种测定总黄酮的含量方法之外，还有单扫示波极谱法、导数光谱法、双波长分光光度法、近红外慢反射光谱法等。
peicaiyun edited on 2006-03-31 18:49

波*

非常感谢楼主对药学版的支持！！

但是您发的资料不太实用，请继续努力，我会关注您的！！

再一次感谢楼主！

飘***7

那能不能弄点实用的呢？
我想用HPLC测柚的总黄酮及柚皮苷的含量，请问我应该用什么方法啊，买什么对照品好呢？还需要其他紫外分光光度计等测定吸收值吗？
小女子先谢过各位大侠了，帮帮忙吧，实在是刚入门什么都不懂啊，急盼回音！！！