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[基础研究] 裸鼠成瘤实验有助于发现卵巢癌基因治疗的新靶点

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发表于 2018-6-11 11:17 | 显示全部楼层 |阅读模式

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无胸腺裸鼠,简称裸鼠,是医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。裸鼠成瘤实验肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等方面,有着特殊的价值。卵巢癌裸鼠移植瘤模型按肿瘤来源可分为人卵巢癌切除标本实体瘤和人卵巢癌细胞株;按接种后所在部位分为皮移植裸鼠模型、腹腔种植裸鼠模型、裸鼠体内原位移植模型。

在裸鼠成瘤实验中,有的瘤株也有可能很容易成瘤,而且生长速度很快,建议用几只动物来试试不同的接种浓度,万一能够长出来,而且还长得很快,那就要根据情况选择一个合适的浓度了。美迪西药理学服务可提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验。

裸鼠成瘤试验中,接种部位一般为腋窝中部外侧皮下,在皮下肿瘤模型中,想要成瘤率高就接种在腋下。接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针,要保证与接种点的距离小于针头的长度,向头部方穿行,绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层,当针头到达接种位点时注射,退出针头,这样操作的目的并不完全是避免漏液,其实熟练后,不需要皮下穿行也不会漏液,主要是避免污染,进针点还有少量污染的可能性的,针头在皮下穿行一段后,接种点离进针点较远,最大限度减少污染的可能。另外裸鼠理论上是1个裸鼠只能接种1针,形成1个肿瘤,因为2个或者以上的肿瘤是会相互影响的。   

为了分析慢病毒转染沉默人转录激活因子5(Activating transcription factor5ATF5)后,对卵巢癌SKOV-3细胞体外增殖、凋亡及体内成瘤的影响,通过体外和体内的实验研究来探讨卵巢癌的基因治疗,探索沉默ATF5的表达后,能否开辟卵巢癌治疗的新方法。方法如下:

1、慢病毒携带小于扰RNA,分别将构建好的携带RNA干扰质粒(沉默ATF5)和空载体的慢病毒感染生长良好的卵巢癌SKOV-3细胞和卵巢癌SKOV-3细胞进行对照,对比观察细胞的生长状态。  

2、MTT法检测细胞的增殖生长。

3、罗氏凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡。

4、采用裸鼠皮下接种细胞的方法,于裸鼠皮下接种成瘤,观察各组裸鼠的存活状态、种植瘤生长情况,进一步计算成瘤率。

5、RT-PCR检测移植瘤ATF5 mRNA的表达情况。

6、Western-Blot检测移植瘤ATF5蛋白的表达情况。

7、HE染色观察瘤组织组织学变化。

结果:

1、在体外培养条件下,SKOV-3的生物学形态没有明显差异。在相同培养时间内细胞的增殖无统计学意义,但RNA干扰的实验组细胞凋亡数量较其他两组明显增多。

2、皮下接种成瘤后,三组裸鼠的成瘤率没有明显区别,但RNA干扰组肿瘤成瘤时间晚,生长缓慢。

3、移植瘤组织RT-PCR显示RNA干扰组mRNA表达量与其他对照组相比差异有统计学意义(P0.05)

4、瘤组织Western-Blot显示RNA干扰组ATF5蛋白表达差异有统计学意义(P0.05)

5、HE染色法观察RNA干扰组分裂相明显减少,凋亡现象明显。

试验最终得出的结论是沉默ATF5的表达后人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长缓慢,这可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。

用卵巢癌细胞株建立裸鼠模型用于卵巢癌的实验研究时,因为不同的卵巢癌细胞株将构建不同生物学特点的裸鼠模型,因此在构建卵巢癌裸鼠模型时必须掌握不同的卵巢癌细胞株所具有的不同特性,以利于选择利用这种特性进行卵巢癌的相关实验研究。

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