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[产科] 张旭博士:人**瘤病毒(HPV)核酸分型定量检测系统

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发表于 2015-11-11 17:22 | 显示全部楼层 |阅读模式

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众所周知,HPV检测在早期宫颈癌筛查中的重要性,尤其是2015年SCCP第一次提出了25岁以上的女性人群HPV病毒学的检测可以作为宫颈癌早期筛查的首选手段。其非常重要的原因包括:① HPV有着高达99%以上的阴性预期值,感染HPV 不代表子宫颈癌的发生,但HPV感染是发生子宫颈癌的必要条件;②若HPV阳性,并且在阳性随访过程中,建立了持续状态的随访结果,其中的高危女性人群,可根据不同亚型有不同致癌性的特点,进一步浓缩了罹患子宫颈癌的高危人群。


HPV检测方法分类

我国对于HPV诊治提出的专家共识:基于现有的宫颈癌病毒基因组的核酸检测方法的前提下,分型成为最主要的推荐手段。分型检测包括:核酸印记法、常规PCR、实时荧光定量PCR、PCR结合反向点杂交技术、基因芯片等。

HPV型别与宫颈癌发生关键因素

HPV分型:不同的HPV亚型致癌率和致癌性不同。 HPV16:宫颈鳞状上皮细胞癌中占51%;HPV18:宫颈腺癌中占56%,宫颈腺鳞癌中占39%。同一高危亚型的持续感染危险系数更高。

根据丹麦的一万多人群筛查检测中显示:如果两次检测HPV均为阴性,罹患宫颈癌的概率定义为1时:若在两年的持续时间内,两次检测均为阳性,但却是不同的亚型,罹患宫颈癌的风险会降到192.7倍左右;若两次检测是同一个亚型,即为持续状态,罹患宫颈癌的风险上升为813倍,基于此研究基础上,我们人类意识到若仅仅做HPV高危亚型的有和无,我们在随访过程中是无法把真正的高危人群浓缩出来的。

丹麦进行的一项12年的回顾型研究显示:8656名22~23岁年轻女性,1578名40~50岁女性,对细胞学正常、HPV阳性者进行筛查并随方中显示:

—随访5年内细胞学异常:年轻妇女17.7%,老年妇女24.5%;
—随访10年内发生CIN3和宫颈癌的风险:年轻妇女13.6%,老年妇女21.2%;
—最初2年,年轻妇女HPV阳性,随后10年≥CIN3风险18%,老年妇女则增加到20%;
—随访12年≥CIN3中: HPV16阳性26.7%,HPV18阳性19.1%,HPV31阳性14.3%,HPV33阳性14.9%,HPV16、18、31、33均为阳性6%,而两次筛查中HPV阳性者高达47.4%。

在中国18~25岁妇女的HPV筛查研究中,我们发现在高级别宫颈病变的病例中,HPV高危亚型存在的比例较高的除16、18亚型外,还有33、31、52、58等亚型。


韩国的Ho-Sun Choi 报道了韩国女性宫颈腺癌和宫颈鳞癌及癌前病变种HPV亚型的分布。包括:2213例宫颈CIN2-3,614例宫颈鳞癌,65例原位腺癌,218例腺癌,发现组织学类型不同,其HPV的基因型别分布是不同的。CIN2-3中最常见的基因型是HPV16、58、33、31和18,分别占54.1%、10.6%、9.6%、5.4%、5.0%。

HPV病毒载量与宫颈癌发生关键因素

在分型研究的过程中,我们越来越意识到分型是如此的重要,但同时我们也感觉到分型也不能满足我们相当的临床需求。在现代医学中,凡是病原微生物感染导致的疾病,疾病的发生,症状的轻重和预后,以及病原微生物的浓度包括**的速度是有关的,因此大量学者便提出HPV病毒载量的多少是否会成为一个***的致癌因素呢?为此,世界范围内的学者便展开了对病毒载量和病理改变相关性的深入研究。

病毒载量是除亚型之外导致肿瘤发生发展的另一个关键因素。大量研究显示:随着病变等级的升高病毒载量相应提高。病毒载量越高女性持续性感染时间越长。病毒载量可预测病毒的清除及疾病的进展。因此我们会想到,若可以把定量和分型结合,我们就更有可能发现真正意义上的高危人群中的高危人群。

HPV检测新技术  (硕世生物HPV分型/定量检测系统)

HPV分型/定量检测系统:由21分型试剂盒(荧光PCR法)+定量分析软件组成,具有准确分型、精确定量的特点。这也是直到2015年我们才实现了把定量和分型结合的HPV检测系统。

那么它是如何实现准确分型、精确定量的呢?

1. 准确分型:荧光定量PCR平台,针对每一个HPV亚型,均有特异性的引入和特异性的探针。到目前为止,在医学界PCR平台其灵敏度和特异性为最高。并且结合HPV矩阵,在8个反应条件下,每一个反应管中有3个不同的亚型反应,为此我们可以做到21个高危亚型的检测。

2. 精确定量:随着科技的发展,不可能的定量检测也变为了可能。宫颈脱落细胞是体细胞,每一个体细胞中均有一个基因组,每一个基因组中都有大量的单拷贝基因,利用荧光定量PCR的定量原理,我们就可以在这个反应体系中,来计算就一个单拷贝基因而言,到底有多少拷贝,得到单拷贝基因的数量,就可以在瞬间得到它的细胞数。据此我们建立了病毒载量数学模型,弥补了取样的不均一性,并把数学模型实体化为定量分析软件。

HPV分型/定量检测系统的特点:①准确分型,分型检测的灵敏度和特异性均在95%以上; ②精确定量,专利软件分析病毒载量,解决了取样细胞均一化的难题;③全封闭扩增及判读,避免样品交叉污染;④项目开展门槛低,通用荧光PCR仪器平台;⑤操作方便快捷,2~2.5小时完成整个过程。

HPV分型/定量检测系统的意义

1. HPV分型检测的意义:①宫颈病变及宫颈癌的早期筛查,高危HPV感染;②对大量细胞学检测结果分流,发现高危人群;③追踪随访相同基因型持续性感染还是不同基因型反复感染;④疫苗的研究与使用。

2. HPV定量检测的意义:①提示患高度病变的风险;②在患者的跟踪和随访中,提示病毒的清除或疾病的进展,为临床医生提供可靠的依据;③治疗结果评估,真实反应病程中量的变化;④ 开放式科研平台,研究不同型别浓度与宫颈病变风险之间的关系。

HPV分型/定量检测系统,第一次使我们人类有了一个统一的平台,可以对所有HPV高危亚型和病毒载量、病理改变之间的相关型研究。
来源:中国妇产科在线

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