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急:做免疫荧光双标,无奈下这样搭配试剂可行吗???

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1# 楼主
发表于 2008-11-15 00:31 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式

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本人实验做免疫荧光双标检测同一张切片上的两种成分,实验对象是裸鼠,A试剂为兔来源的一抗,RBITC标记的羊抗兔的二抗;B试剂为FITC标记的mouse抗某成分的单克隆抗体(一抗)。请问这样的两种试剂可以同时应用去做荧光双标吗?会不会效果不好?或很明显的一强一弱(因为B试剂只有一抗,没有二抗)?
或则,B试剂改为mouse抗某成分的单克隆抗体(一抗),FITC标记的驴或羊抗小鼠的二抗,但实验对象是裸鼠,不知道这样可行不?
(A、B两种试剂都很不好找,所以选择受到了限制,B试剂要么是鼠源,要么是兔源,有点让人抓狂啊!)
急盼有这方面经验的同学指教,十分十分感谢!!!
2# 沙发
发表于 2008-11-15 12:52 | 只看该作者
哪位有经验的老师或同学帮帮忙啊!谢谢谢谢!
3# 板凳
发表于 2008-11-19 14:08 | 只看该作者
二抗肯定是要有的,没有的话,背景一个深一个浅,不好辨别。对于什么来源的单克隆抗体都没有大的关系,只要一抗可以结合抗原,二抗可以结合一抗就可以。你没有专门的试剂盒吗,搭配好了是可以,但是肯定没有配套的强。不管如何二抗一定要有的。:)
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