椎间盘免疫组化相关问题

刀**锋

本人想要做人椎间盘的免疫组化实验，想要检测里面的一个蛋白，有几个问题想要请教一下各位前辈：
1-我用的椎间盘不是新鲜的，在-20度冰箱保存的，请问这个可以吗？
2-我看那个一般来说组织的大小是2cm x 1.5cm x 3mm ，我这个椎间盘也用切成那么大小的组织块吗？
3-椎间盘如果要是切片的话，好切吗？一般来说厚度应该是多少呀？
还望各位前辈不吝指点一二，小弟不胜感激！

刀**锋

:'( :'( :'(

p****y

原帖由 刀魂无锋 于 2007-12-25 14:41 发表

                               
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1-我用的椎间盘不是新鲜的，在-20度冰箱保存的，请问这个可以吗？
2-我看那个一般来说组织的大小是2cm x 1.5cm x 3mm ，我这个椎间盘也用切成那么大小的组织块吗？
3-椎间盘如果要是切片的话，好切吗？一般来说厚度应该是多少呀？
还望各位前辈不吝指点一二，小弟不胜感激！

1：
是直接把组织冻存，还是用固定液后的？你的蛋白在组织中的丰度和降解速度如何？
2：
和普通蜡块一样就行，小一点儿也没关系
3：
不脱钙的话，试试用快一点儿的刀，切片会偏厚，但这样会让抗原保存的比较完好。
脱钙切片容易一些（10%EDTA脱钙1周），可以切的更薄，修复时候也不容易飞片，但组化效果可能差一些，这个需要你自己摸索。
厚度与普通组织切片类似，4~6μm

[ 本帖最后由 pathology 于 2008-1-1 15:17 编辑 ]

刀**锋

原帖由 pathology 于 2008-1-1 15:15 发表

                               
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1：
是直接把组织冻存，还是用固定液后的？你的蛋白在组织中的丰度和降解速度如何？
2：
和普通蜡块一样就行，小一点儿也没关系
3：
不脱钙的话，试试用快一点儿的刀，切片会偏厚，但这样会让抗原保存的 ...

谢谢指点！
1：组织是直接冻存的，没有用固定液。至于丰度和降解速度不是特别清楚，文献报道很少！
2：间盘组织也用脱钙吗？它不是只有髓核和纤维环组成的，没有钙化组织吗？
还望指教！小弟不胜感激！

p****y

原帖由 刀魂无锋 于 2008-1-2 10:39 发表

                               
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谢谢指点！
1：组织是直接冻存的，没有用固定液。至于丰度和降解速度不是特别清楚，文献报道很少！
2：间盘组织也用脱钙吗？它不是只有髓核和纤维环组成的，没有钙化组织吗？
还望指教！小弟不胜感激！

估计问题不大，不过最好放-80长期保存，或者还是尽快制片吧
正常情况下可能没有钙化，但是有时候取材不准或者纤维化程度过高，都会偏硬

f****h

原帖由 pathology 于 2008-1-1 15:15 发表

                               
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1：
是直接把组织冻存，还是用固定液后的？你的蛋白在组织中的丰度和降解速度如何？
2：
和普通蜡块一样就行，小一点儿也没关系
3：
不脱钙的话，试试用快一点儿的刀，切片会偏厚，但这样会让抗原保存的 ...

10%EDTA脱钙1周？ 和免疫组化 修复用的 EDTA  是一个东东么？