细胞学标本的固定方法

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细胞学标本的固定方法

固定的目的是要保存细胞的形态结构，以利于染色之后清晰地显示细胞的形态。因此固定液和固定方法便成为重要的因素，选择固定液和固定方法是制做高质量涂片的前提。

1.固定液  最常用的固定液为95%的酒精。酒精作为一种脱水剂能够防止细胞内的酶将蛋白质分解和自溶，凝固细胞内的物质（蛋白质、糖类和脂肪等），使细胞保持清晰的结构，也易于细胞结构的着色。在Pap和HE染色方法制片时，特别注重这种固定液及其方法。这种固定液也能保存抗原，因而利于免疫细胞化学染色。有些实验室在95%酒精中滴加冰醋酸以溶解红细胞。95%酒精是可以满足细胞学标本的基本要求的。

在针吸标本做电镜检查时，应采用4%戊二醛固定24小时以上，在制做电镜切片前还需用1%***固定液固定一小时。

2、固定方法  标本在经涂片后固定的方法至关紧要。一般认为采用湿式固定（湿固定）的效果最佳，涂片后趁标本新鲜而湿润时，立即投入盛有固定液的固定缸内。必须注意的是不可久置致使干燥后进入固定液，也不能在固定后干燥，因为干燥涂片均会影响染色的效果。标本若为粘稠物应立即固定；若为液体标本，在树起载玻片不流动的情况投入固定液，为防止收缩流动采用喷雾法固定或滴加法固定。总之，在潮湿状态下固定的涂片染色效果最佳。

对于淋巴结的针吸涂片在固定时，固定液95%酒精的浓度应该在90%至93%的浓度之间，因为淋巴细胞的胞质量少，易为固定液所穿透，造成细胞或核的收缩变形，致使观察困难，尤其是细胞核辩认更是无法观察。

95%酒精固定液就应该及时更换，一般每周更换一次或每固定100张淡片后应更换固定液一次，以保持酒精的浓度在最佳状态。

固定的时间一般常规制片应在2-3小时左右为宜，快速涂片在轻薄和均匀的情况下5分钟左右即可，但要注意多做几张涂片备用并留一张作常规染色。