【推荐】Th1和Th2细胞的检测

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Th1和Th2细胞的检测

测定Th1和Th2亚群的变化，可以了解机体免疫状况的变化，与传统的临床检验项目不同 ,其意义并不着重于辅助疾病的诊断 ,而更注重分析疾病发生发展的状况 ,为临床调整 Th1 / Th2失衡 ,提供正确的治疗措施。由于目前尚无区分Th1和Th2细胞的表面标志物，所以只能根据细胞亚群分泌特征性细胞因子的不同，间接检测Th1和Th2细胞的数目和功能。用IFN-γ反应Th1，IL-4,10反应TH2，常用方法有：
1．细胞外因子的检测：通过检测血浆或其他体液，培养液的Th1/Th2类细胞因子，间接推测其功能，常用ELISA方法：利用抗原抗体结合，蛋白质粘附膜板等特性，检测Th1/Th2细胞外的细胞因子，部分可以定性和定量。注意点在于标准品的选用，标准品十分重要, 美国**癌症研究所生物反应调整专题(BRMP.,NCI)与英国**生物标准化和控制研究所(NIBSC)被定为WHO细胞因子标准品提供机构。[1]
2．细胞外因子的检测： 常用间接免疫荧光染色法。其基本原理：对PBMC细胞经体外短暂培养[2]（有文献报道：全血培养检测Th1和Th2亚群），在合成的细胞因子分泌前，将单个细胞用多聚甲醛固定,皂素渗透后,使抗细胞因子抗体进入细胞；在胞浆内与相应的细胞因子形成复合物，再借助酶或荧光显示。
3．mRNA的检测：常用RT-PCR的方法：以mRNA为膜板，在逆转录酶的催化下，合成与其互补的cDNA为模板，用PCR技术对靶序列进行扩增,使微量mRNA经放大后检出。
4．流式细胞仪检测：基本原理是用**剂黄能霉素（monensin）**细胞, 细胞内蛋白质转运方式被打乱,以致细胞因子聚集于高尔基体，引起细胞因子向高尔基体积聚,这样通过流式细胞仪便可检测出增强的细胞因子,这一技术的发展使得以往通过Ｔ细胞克隆方式在几个月才能回答的问题,在几个小时内得以解决,该技术成为单细胞水平上检测细胞因子产生的标准分析方法。尽管细胞因子标记流式细胞技术具有其它方法无可比拟的优越性，但是在操作过程中，需要对细胞进行**、阻断、固定、穿透和标记，任何一个环节都会影响实验的结果。[3]
总的来说，上述方法中Th1细胞的检测相对容易，因为Th1细胞表达大量的IL-2 IFN-r, Th2细胞在标本中出现频率较低，所以有人建议用CD45RO-细胞代替Th2检测。[4]
5．IgG1和IgG2a的检测：机体中如Th1占优势，IgG2a将多于IgG1；如Th1占优势，IgG1将多于IgG2a；IgG1和IgG2a均有商品化的抗体。这是一种Th1/Th2功能的粗略检测方法。[5]
6．特异性标记分子的检测：国内外很多文献证明，IL-Rβ2亚单位只在分化为Th1的T细胞表面表达，通过检测它可特异性区分Th亚群的变化，这是一个研究热门。[６]另外刘俊铎等通过体外实验发现 ,绝大部分具有 Th1细胞因子特性的活化的CD4+T细胞克隆在细胞表面出现 LAG- 3的表达 ,而几乎所有的 Th2细胞克隆既无LAG- 3 m RNA亦无膜 LAG-3表达。LAG- 3与 Th1细胞因

子的关系提示 LAG- 3可以作为 Th1细胞反应的标志物。[7]而CD3 0在已建立的人类 Th1、Th2、Th0、CD4+细胞克隆中的表达存在差异：Th1克隆仅少量表达或不表达 CD3 0 m RNA,其CD3 0膜结合形式及可溶形式也处于极低水平或根本无法检测到 ，Th2克隆则显示CD30 m RNA持续表达和 CD3 0膜结合形式的高度表达、并释放大量 sCD30。CD30与Th2相关性提示 CD3 0可以作为 Th2细胞激活的标志物。通过免疫组化方法分析组织中 CD3 0阳性细胞及测定体液中 sCD3 0水平 ,可用以评估 Th2细胞反应在介导各种免疫疾病中地位。[8]
T1最初作为血清和肿瘤蛋白诱导基因选择表达在Ｔｈ2细胞上 ,属于IL1R家族成员。比较T1 /ST2和其它同源IL1R如Toll和 1 8 Wheeler,发现它们有相似的序列。后来证明 ,Ｔ1 /ST2基因仅选择表达于Ｔｈ2细胞上。另外 ,T1 /ST2表达与IL4产生之间紧密相关 ,而且Ｔ1 /ST2可以作为Th2细胞的一个稳定标志,因此有可能把它作为区分Th1/Th2细胞的稳定标志物。[9]