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临床检验标本采集和保存
标本采集是直接关系检验结果的基本要素，如果标本采集不当，即使最好的仪器设备也难以弥补在采集标本时引入的误差和错误。
标本保存和运送是检验质量保证的重要环节之一。由于采集的标本受各种因素的影响，可能使检验结果受或大或小的误差，因此必须正确掌握标本保存和运送。
一 血液标本采集和保存
采血管分普通管、抗凝管和促凝管三类。常用抗凝剂有草酸钾、草酸钠、枸橼酸钠、EDTA-K2或EDTA-Na2、肝素、氟化物等。根据不同的检验项目，选用合适的抗凝剂十分重要。
    1、选择抗凝剂注意事项：
1)含有K+、Na+的抗凝剂不能用于测定K+、Na+的标本。
2)EDTA、氟化物、草酸盐等不能用于测定Ca2+的标本，因为Ca2+可与它们形成不溶性物质。
3)草酸盐、氟化物不能用于测定酶和用酶法测定的标本，因为它们有激活或抑制某些酶活性的作用，如草酸盐可抑制AMY、ACP、LDH的活性，氟化物则有激活尿素酶、AMY的作用。
4)草酸钾：钙离子螯合剂，常用量为1～2mg/ml血液。草酸钾虽仍可应用，但使红细胞缩小，水分从红细胞渗入血浆，使血浆成分浓度相应偏低。
5)草酸钾氟化钠混合抗凝剂：专供葡萄糖测定用，氟化钠1g，草酸钾3g混合，混合剂4mg抗凝1ml血。
6)肝素：是一种粘多糖体，可抑制凝血酶原转化为凝血酶，使纤维蛋白原不能转化为纤维蛋白。以15±2.5IU抗凝血液1ml。肝素抗凝血不影响红细胞体积，可用于生化及血液学检验标本，但不可用于筛选DIC的3P和TT试验，因肝素与鱼精蛋白作用，发生沉淀，使3P出现假阳性以及肝素的抗凝血酶作用出现产生干扰。
7)EDTA：与钙离子络合而抗凝，通常血液学常规检验应用其钾盐EDTA-K2或EDTA-K3 。EDTA-Li2 亦可作为抗凝剂，且可用于大多数生化检验。
8)使用抗凝剂要注意血与抗凝剂的比例，如血沉取106mmol/L的枸橼酸钠0.4ml，抽1.6ml血；凝血机制取0.2ml，抽1.8ml血；血常规用EDTA抗凝管抽1.5ml血；血生化用肝素抗凝管抽3ml血等。
    2、标本采集注意事项：
1)末梢采血时，务必清洁消毒，待干燥后穿刺，用1次性采血器。婴儿可取自脚后跟两侧处，一般不取手指，采血中不可用力挤压，以免组织液混入血液，使血液易于凝固和稀释，出现误差。
2)采静脉血时止血带结扎过久，可引起误差。如以结扎1min的样品结果为基数，则结扎3min，可使血浆总蛋白增加5％，胆固醇增加5％，铁增加6％，胆红素增加8％，乳酸则不能使用止血带。
3)血清标本应避免溶血，并及时分离血清，如需隔日检验，应封口后冰箱储存。
4)采血用针头过细会使血K+升高。
5)要特别注意采血不能在输液的同侧进行，更应杜绝在输液管内采血，因输液成分会影响检测结果(使相应的结果偏高，如输K+、Glu时，可使所测K+、Glu明显增高)，或使血液稀释结果偏低。
6)血气和pH值测定的血液以动脉血为原则，且不可漏气。细胞培养的样品要采用无菌技术，防止污染。
7)标本采集后，必须在试管或容器上贴上检验申请单号码、住院病人应有床号、姓名，且应当场核对无误。
3、标本保存、运输注意事项：
1)采样后须立即送检的常规项目：血氨、血沉、血气分析、酸性磷酸酶、乳酸以及各种细菌培养，特别是厌氧菌培养。
2)采样后0.5h内送检的常规项目：血糖、电解质、血液细胞学、体液细胞学等。
3)采样后1～2 h内送检的常规项目：各种蛋白质类、色素类、激素类、脂类、酶类、抗原、抗体测定等。
4)采样后2 h以上才能送检者，则常对标本采取必要的保存手段。对血糖或乳酸可直接分离血清后冷冻保存，或用NaF作稳定剂2～8℃密封保存；K+ 必须分离血清后密封2～8℃存放；ACP须加稳定剂后分离血清冷冻保存；对其他一般项目，可加盖密封后直接2～8℃存放，但血沉和细胞学检查不能采用此方法。
5)标本保存1个月：一般对检测物分离后，-20℃存放。
6)标本需长期保存(3个月以上者)：对检测物分离后(包括菌种) -70℃保存，还应避免反复冻融。




二、尿液的收集和保存
(一) 尿液的收集
根据检验目的，常用如下尿标本。
1．首次晨尿：即留取清晨第一次尿，因较浓缩、条件恒定，便于对比，适合住院病人，能真实地反应肾脏病情况。
2．随机尿：不为条件所限，适于门诊、急诊病人，但受多种因素的影响，有形成分的浓度较低。
3．午后尿：午餐后2h尿中尿胆原和糖含量高，适于这两种成分的检验，可提高阳性检出率。
4．12h尿：头晚8时排空膀胱并弃去此次尿液，再收集至翌晨8时前的全部尿液，适用于Addis尿沉渣计数。
5．3h尿：收集清晨5～8时尿标本，用于1小时尿沉渣计数。
6．24h尿：适于代谢产物24h定量测定，如尿蛋白、糖、钠、钾、氯、钙、尿酸、17-羟皮质醇和17-酮皮质醇等。应准确的收集24h尿液并测尿量，从混匀尿液中采集100～200ml送检。收集24h尿液应根据检验目的加入适当防腐剂。24h尿液沉渣还可用于找抗酸杆菌。
7．特殊**采集尿标本：如分别采集直立或运动后尿标本与平卧8h后尿标本，对**性蛋白尿、运动性血尿诊断有帮助。
8．下午2点钟至4点钟留取尿标本：适于尿胆原检查。
9．清洁尿(中段尿、导尿、膀胱穿刺尿等)：适于细菌培养，应注意无菌操作。
(二) 尿液采集注意事项
    1．应用清洁、有盖、干燥、最好为一次性容器，防止日照与污染。
2．采集尿液量：尿常规与一般定性检查留取尿液约100ml。
3．尿标本要新鲜，留取后立即送检。放置4h以上尿中成分可发生变化，如红细胞、白细胞溶解等。
4．尿标本要防止月经血、白带、**、前列腺液、粪便、烟灰等异物混入。为此应避免月经期验尿。女性患者先要清洁外**，用0.1%苯扎溴铵溶液浸过的棉球擦洗外**并消毒尿道口。一般检查留取晨起第一次清洁中段尿，作细菌培养者应先做尿道口局部消毒处理并注意无菌操作。
5．尿胆原等化学物质因光分解或氧化，需要避光。
(三) 尿标本的保存
尿液排出后即逐渐发生物理和化学变化，因此，尿标本收集后应立即检查，不能及时检查或需留取大量标本时，应适当防腐。常用方法有：
1．冷藏：尿标本放4℃冰箱可保存6～8h，高浓度无定形磷酸盐即使在冷藏情况下也可析出结晶。
2．化学防腐法：
(1) 甲醛：用于管型和细胞防腐，不适于尿糖等化学成分检查。按400g/L甲醛5ml/L尿加入。
(2) 甲苯：用于尿酸、蛋白、钠、钾、氯、钙、磷等防腐，按5ml/L尿加入。
(3) 浓盐酸：用于尿内17-羟皮质醇和17-酮皮质醇、儿茶酚胺等测定时作防腐剂，按1ml/L尿加入。
三、粪便标本采集方法及注意事项
1．        通常采集自然排出的粪便。
2．各种检查用的粪便标本中不得混有尿液、消毒剂及污水等。
3．采集待检粪便时，应取粘液、脓血等病理部分，日本血吸虫孵化毛蚴时至少留取30g粪便尽快处理。
4．留作隐血试验的标本，检查前3日禁食肉类及动物血并禁服铁剂及维生素C。
四、痰液标本的采集
痰液是气管、支气管及肺泡分泌物的总称，主要是由呼吸道的粘液腺和怀状细胞所分泌的粘液并混有呼吸道的一些脱落物和上呼吸道细菌等组成。检查痰液有助于呼吸系统疾病的诊断和鉴别诊断。
留取痰液标本的方法有自然咯痰法、气管穿刺吸取法、经支气管镜抽吸法等。根据检查目的而异：一般检查以清晨用清水漱口后咯出气管深处的第一口痰为宜；作细菌培养，应先用灭菌水漱口，咳痰后置无菌容器及时送检，以免细菌和细胞自溶；作漂浮或浓集结核杆菌检查时，需留12～24h痰液；对于小儿，可用消毒棉拭**喉部引起咳嗽反射，用棉拭子刮取标本送检；作24h痰量和分层检查时应咯痰于无色广口瓶中，可加少许石炭酸以防腐；作细胞学检查时，嘱病人用力将喉内的头两口痰咳出弃去，然后咳出至少5～6口痰(总量约5ml左右)送检。
五、**分泌物标本采集
**分泌物为女性生殖系统分泌的液体，俗称“白带”。妇科医生为患者做妇科检查时，用消毒棉签取少许白带置于已准备好的生理盐水试管中送检。
取**分泌物之前应避免性生活、**冲洗和上药。取材后，应立即送检。湿涂片检查**毛滴虫时标本应注意保温。

六、关节腔积液标本采集
在无菌条件下由医生行关节腔穿刺术采集标本，立即送检。标本可分为三份，分别置于：
1．透明玻璃管：观察一般性状和凝固性。
2．抗凝管内(肝素抗凝)：进行显微镜检查和化学检查。
3．无菌管内：进行微生物学检查。
七、唾液标本的采集
采集唾液时，应先嘱受试者用温水漱口，漱毕后5～10min采集。采集时，可以直接使用导管自各腺体的开口处吸取，或将自然流出的唾液收集在赶紧试管内，离心分离，吸取上清液供分析。如果病人不易自然流出唾液，可将少量消毒脱脂棉放入受者舌下数分钟，取出挤压棉球得到唾液。


八、临床培养标本的采集：
（一）血液及骨髓标本的采集
1．        应在病人发热初期或发热高峰时采集。一般情况下，要选择在抗菌药物治疗之前，对已用药物而不能中止的病人，也应在下次用药之前采集。
2．以无菌方法取病人静脉血5ml，立即注入培养基中(约50ml)，轻摇混匀。骨髓采集应在严格消毒后抽取骨髓1～2ml。
3．采血量一般为培养基的1/10，婴幼儿采血1～2ml；对已用药的病人，可使血：培养基为1:20或更高；亚急性感染性心内膜炎及布鲁杆菌病，要多次采血和增加采血量，并主张此种病人应从肘动脉或股动脉采血。
（二）尿液标本的采集
1、标本采集
⑴.中段尿采集法：是临床上最多采用的方法，女性病人先以肥皂水或1:1000高锰酸钾水溶液冲洗外**及尿道口；男性病人应翻转包皮，用肥皂水或1:1000苯扎溴铵冲洗或消毒尿道口，再用灭菌纱布擦干，让病人排尿，弃去前段尿，收集中段尿10～20ml，盛于无菌容器内立即加盖送检。
⑵.导尿法：采取导尿管导尿法，是一种较好的无菌采集法。取得10～15ml尿液盛于无菌容器中送检。
⑶.肾盂尿采集法：确定菌尿是否来自肾脏。可用尿管采集肾盂尿，首先充分冲洗膀胱，以最后一次冲洗尿作对照，后用导尿管插入输尿管，分别标记左右侧，各收集三次尿；如果输尿管菌数比对照尿菌数多或第三次尿中菌数比第一次多，该菌尿可能来自肾脏；反之，如果第一次尿菌数多于第三次尿菌，则可能来自膀胱。肾盂尿采集法一般应该请泌尿科医师协作进行，并确实做了标记，以防左右侧搞错。
⑷.膀胱穿刺尿采集法：将病人耻骨上皮肤经碘酒、酒精消毒后，以无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液中厌氧菌的培养，故在取得尿液后，针头插于橡皮塞上送检。当儿童或婴儿采集中段尿困难或培养结果于患者病情有矛盾时，可考虑用此法采集尿液。
⑸.留尿法：尿液检查结核分枝杆菌时，可用一洁净容器，留取24h的尿液，取其沉淀部分盛于清洁瓶内送检。
2、注意事项
    ⑴.尿液标本的采集和培养中的问题是污染杂菌，故应严格进行无菌操作。
⑵.尿液标本采集后要立即送检或存放于4℃冰箱，因搁置时间稍长，尿中病原菌可在室温中增殖，而影响细菌计数的正确性。
⑶.通常应取晨起第一次尿送检。
⑷.由于治疗所用药物多数均通过尿液排泄，因此无论用何种方法采集尿液都宜在用药前进行。
⑸.尿液标本中不得加防腐剂，否则会影响检出的阳性率。
（三）粪便标本的采集
1、标本采集
粪便多采集自然排出之粪便，亦可用直肠拭子法采集。
⑴.自然排便采集法：自然排便后，可挑取有脓血、粘液部分的粪便2～3g。液体粪便取絮状物，盛于灭菌的广口瓶或蜡纸盒中，或置于保存液或增菌液中送检。
⑵.直肠拭子法：如不易获得粪便时或排便困难的患者及幼儿，可采用直肠拭子法采便。其方法是将拭子前端用甘油湿润。然后插入**约4～5cm(幼儿约2～3cm)处，轻轻在直肠内旋转，擦取直肠表面粘液后取出，盛入无菌试管或保存液中送检。
2、注意事项
⑴.粪便标本中含有很多杂菌，粪便标本的采集须注意防止外界脏物污染。
⑵.为提高阳性检出率，要采集新鲜标本，立即送检，若能进行床边接种可提高检出率。
⑶.腹泻病人应尽量在急性期(3天)内采集标本，以提高检出率。
⑷.标本最好在用药前采集。
⑸.用于厌氧菌培养的标本，应尽量避免接触空气，最好立即培养。在不得已时，可将粪便置于无菌容器内于4℃保存，但不能超过24h，不能采用低温冷冻(-20℃～-80℃)保存。（四）脑脊液标本的采集

1、标本采集
由临床医师以无菌操作采集脑脊液3～5ml，盛于无菌试管或瓶中送检。
2、注意事项
    ⑴.由于脑膜炎奈瑟菌离体后极易自溶，流感嗜血杆菌及肺炎链球菌也易死亡，故检查这类细菌时无论是作涂片镜检，还是进行培养检查，均须立即送检。
⑵.由于某些细菌如脑膜炎奈瑟菌对外界环境抵抗力很低，对寒冷和干燥均敏感，故标本应注意保温(25～27℃)、防止干燥和避免日光直射。
⑶.最好在应用抗生素治疗前采集标本。
⑷.穿刺过程中要严格无菌操作，切实防止污染。
（五）胆汁标本的采集
胆汁采取的方法有三种：十二指肠引流法、胆囊穿刺法及手术采取法。
    ⑴.十二指肠引流法：本法较常用。即在无菌操作下用导管作十二指肠引流采取胆汁。所采取的胆汁分A、B、C三部分，A液来自总胆管，为橙黄色或金黄色；B液来自胆囊，为棕黄色；C液来自胆道，为柠檬色。因采取时通过口腔，常易混入口腔内的正常菌群，一般认为B液作细菌培养意义较大。
⑵.胆囊穿刺法：行胆囊造影术时，可同时采取胆汁。本法所采之胆汁不易污染，适宜作细菌培养。
⑶.手术采取法：在进行胆囊及胆管手术时可由总胆管、胆囊直接穿刺采取胆汁。本法所采集之胆汁也不易污染，适于作细菌学检验。
以上采集之标本应立即送检，否则应保存于4℃冰箱中。
（六）生殖系统标本的采集
1、标本采集
生殖器感染病变种类繁多，需根据不同病变特征及检测目的收集不同标本。
⑴.分泌物标本：尿道及尿道口标本，先用生理盐水局部清洗，用无菌棉拭子插入尿道口1～2cm，停留10余秒钟，轻轻旋转采集标本；外**糜烂、溃疡，先用生理盐水清洗，然后用无菌棉拭子擦取边缘的分泌物；**及宫颈口分泌物则在窥阴器下操作，用长的无菌棉签采集分泌物；前列腺则需进行前列腺**获取。
⑵.穿刺液标本：生殖器疱疹应先用碘酒、乙醇消毒后应用无菌皮试注射器刺入采取疱疹液；女性盆腔脓肿则在**局部消毒后，由直肠、子宫凹陷处进针抽取；子宫内分泌物用无菌导管抽取，导管外套一层保护膜插入子宫后再刺穿保护膜抽取分泌物。
⑶.组织标本：尖锐湿疣或假性湿疣，可切取组织块进行组织印片或制备病理切片。
2、注意事项
    ⑴.生殖器官是开放性器官，采集标本时应严格遵循无菌操作以减少杂菌污染。
⑵.**内有许多正常菌群，采集标本应尽可能不触及**壁。
⑶.衣原体和病毒均为细胞内寄生微生物，采集标本时应在取材部位(移行上皮处稍内)停留几十秒钟，并擦取内壁细胞。
⑷.生殖道感染厌氧菌也较多见，采标本时注意避免与氧气接触和正常菌群污染。
⑸.淋病奈瑟菌抵抗力低，故采集标本后要尽快送检。

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