【上传】生化讲义

七**星

第一章
蛋白质：（Pr）
结构
   元素组成：C、H、O、N（含量恒定16%）
   基本组成单位：氨基酸(aa)
   1.结构：20种
（1）        R为羟基：丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸，最常见的化学修饰—磷酸化与去磷酸化部位
（2）        R为巯基：半胱氨酸，a在酶中组成活性中心b巯基氧化，维持蛋白质结构
（3）        酸性氨基酸：谷氨酸、天冬氨酸
（4）        碱性氨基酸：精氨酸、赖氨酸、组氨酸
   2.理化性质：两性电解质：等电点（PI）概念
（1）PH＞PI带负电
（2）PH＜PI带正电
   3.功能：除个别氨基酸（甘氨酸合成血红素、结合胆肝酸）以外，氨基酸的主要功能为合成蛋白质
氨基酸通过肽键形成多肽链
    1.肽键为蛋白质主键，
    2.N端到C端即氨基端到羧基端
蛋白质的结构：
    一级结构：（1）氨基酸在蛋白质或多肽中的组成和排列顺序
             （2）由编码基因的序列决定
    二级结构：在一级结构的基础上折叠盘旋形成二级结构
            α螺旋：氢键（影响螺旋形成的因素：电荷、位阻，不易形成氢键的氨基酸如羟脯氨基酸）
β片层
无规卷曲
次级键的作用为维持蛋白的空间结构：氢键、盐键、范德华力、疏水键、二硫键
考点：二级结构的几种形式及其影响因素
三级结构：在二级结构基础上进一步折叠、盘旋形成
        （1）形状为椭圆形
        （2）维持结构：次级键，主要为疏水键
        （3）疏水基团在内，亲水基团在外：变性蛋白质是由于疏水基团暴露在外
意义：活性区域的形成
      四级结构：概念：由二个或以上的具有三级结构的多肽链组成，此具有三级结构的多肽链的称为亚基
                     并非所有的蛋白质只有在形成三级或四级结构以后才具有功能，有的蛋白质在一级结构时就具有功能
蛋白质的理化性质：
1.280nm具有的最大吸收峰
2.高分子化合物，不易通过半透膜
3.两性电解质，也有等电点
4.沉淀和变性
（1）沉淀：沉淀是指蛋白质从溶液中析出的现象
           蛋白质在溶液中存在的稳定因素：表面电荷、水合膜
           蛋白质沉淀法：盐析法、有机化合物法、金属离子
           蛋白质分离法：分子量不同：分子筛
                         表面电荷不同：层析法
（2）变性：指在外界理化因素的影响下，蛋白质的次级键被打断，而肽键未断，蛋白质的空间结构遭到破坏，而一级结构未改变导致蛋白质的理化性质和生物学功能改变
          理化性质改变  1不对称性增加，粘稠度增加
                        2易同化学试剂起反应
                        3易被蛋白酶水解
                        4功能减弱或丧失
                        5往往会沉淀：蛋白质变性后往往会沉淀，但沉淀的蛋白质不一定变性。
                      沉淀但不变性的方法：盐析
                                                冷乙醇或冷丙酮
蛋白质的变性后的复性
蛋白质的功能：举例说明蛋白质的一级结构和高级结构与蛋白功能的关系
分子病：概念：基因突变引起的蛋白质变化：遗传性疾病

第二章  核酸
碱基组成   +   戊糖  +  磷酸  →  核苷酸  
DNA    ACTG       脱氧核糖    √
RNA    ACUG         核糖      √
主键：3′，5′磷酸二酯 键
方向性：5′→ 3′   
DNA的一级结构：1.碱基的组成和排列顺序
                 2.遗传信息就蕴藏在碱基的排列顺序之中
                 3.人类基因组计划就是测定碱基的排列顺序
二级结构：碱基组成特点
    1.A=T    G=C
    2.对同一种属和同一个体中碱基组成无组织器官特异性
    3.有种属特异性
    4.不随年龄、外环境或营养状况的改变而改变
双螺旋结构：
    1.平行的，走向相反的两条多核酸链通过碱基互补配对形成
碱基在内、磷酸、戊糖在外
         2.右手螺旋  每上升一圈含10个碱基对，螺距3.4nm
         3.大沟、小沟
三级结构    核小体：概念
RNA：  均为单链结构，但局部可形成双链
      mRNA:5′帽
             3′尾  PolyA
             编码区AUG——UAG、UAA、UGA
              
针对3′尾PolyA可从总的RNA中分离mRNA
      tRNA   1.二级结构为三叶草结构,三级结构为倒L型
              2. 3′CCA
              3.CCA与氨基酸相连
              4.二氢尿嘧啶环：稳定结构
反密码环：识别mRNA上的密码子，反密码子第一个常为I次黄嘌呤，常与第三个密码子不严格配对，称摆动配对
TψC环
额外环
aa臂
考点：简述tRNA的结构特点
比较：mRNA、tRNA、rRNA的功能和特点，
功能                      特点
mRNA   蛋白合成模板                  含量最少，1~2%，半衰期最短
tRNA    转运氨基酸                    含稀有碱基最多
rRNA    与核糖体结合为蛋白质合成场所  含量最高      
核酸的理化性质
  1.260nm处有最大吸收峰
  2.高分子化合物、透析离心来纯化
  3.DNA变性：概念  在外界理化因素的影响下，将连接两条多核苷酸的氢键打断，而3′、5′磷酸二酯键未断
高色效应
变性温度Tm（解链温度）与CG含量、DNA长度有关
DNA变性后复性：加热变性后放室温缓慢复性，加热变性后，迅速置于冰上不能复性——分子杂交原理

第三章  酶    学
概念：以前酶的本质是蛋白质，现在有些酶是核酸，称为核酶，具有酶催化活性的核酸
核酸酶：是有水解核的能力的酶称为核酸酶
单纯酶
结合酶：辅基：不易于酶蛋白分离的辅助因子
       辅酶：易通过透析等与酶蛋白分离的辅助因子
酶的活性中心：与酶的催化活性密切相关的特殊区域，是立体结构
必需基团：与酶的催化活性密切相关的基因称为必需基团，并非所有的必需基因都位于酶的活性中心内，有的与底物结合有关，有的与酶结构有关
酶原：没有酶活性的酶前体
酶原的激活：胰蛋白酶原在肠激酶的作用下，N端切除6个肽，激活为胰蛋白酶。实质为活性中心的形成
同工酶：结构、理化性质、免疫性质不同，但可以催化同一个反应的酶，对协调各个组织代谢起重要作用
别构酶：常由两个亚基组成，一个为调节亚基，一个为催化亚基，小分子物质与调节亚基结合后，使催化亚基空间结构改变，活性中心形成，使催化活性上升，此小分子物质为别构激活剂，反之，若使催化活性下降，为别构抑制剂
酶促反应的特点：
   1.极高的催化效率，在于能降低反应的活化能
   2.高度的特异性
   3.可调节性
快调节：化学修饰  乙酰化、甲基化、磷酸化
慢调节：酶量的调节
   酶促反应动力学
1.底物浓度：米氏方程
Km反映了酶和底物的亲和力，Km高，亲和力小

2.温度

3.PH值

4.酶的浓度

5.激活剂
6.抑制剂
不可逆抑制：抑制剂与酶结合比较紧密，不易分开
可逆抑制：抑制剂与酶结合疏松，易分开，分为：
竞争性抑制：抑制剂与底物竞争性和酶的活性中心结合，Km升高，Vmax不变
非竞争性抑制：抑制剂与酶的活性中心以外的部分结合，Km不变，Vmax降低
反竞争性抑制：抑制剂与酶和底物的中间态结合，抑制酶促反应速度，Km降低，Vmax降低
        在所有的影响之中，只有PH和T才有最佳值

第四章  糖代谢
三大营养物质：糖、脂类、蛋白质，核酸不是营养物质
分解代谢
合成代谢
生理意义
调节
以分解代谢为侧重点
无氧分解：糖酵解、无氧、生成乳酸、少量能量
1.        胞液
2.        关键酶（活性最低，不可逆反应）葡萄糖激酶，6-磷酸果糖激酶，丙酮酸激酶
3.        ATP的生成和消耗
4.        重要的中间化合物：磷酸二羟丙酮是连接甘油和葡萄糖相互转变的枢纽6-磷酸葡萄糖是所有糖代谢的枢纽
5.        底物水平磷酸化反应：1，6二磷酸甘油酸、磷酸烯醇式丙酮酸为高能化合物
        意义：特殊情况下提供能量，如长跑、缺氧，特殊组织提供能量，如红细胞、肿瘤细胞
有氧氧化：概念  
      意义：能量来源的主要方面
      过程：丙酮酸在丙酮酸脱氢酶的作用下生成乙酰CoA，乙酰CoA进入三羧酸循环
三羧酸循环：1.四次脱氢，两次脱羧，一步底物水平磷酸化GDP→GTP
             2.三羧酸循环不仅是三大营养物质代谢的共同通路，也是三大营养物质相互联系的枢纽，乙酰CoA是连接三大营养物质的交汇点
    磷酸戊糖途径：关键酶：6-磷酸葡萄糖脱氢酶
                  功能：生成5-磷酸核糖为核苷酸的合成提供了原料
                        生成大量NADPH+H+ ：1.为物质合成提供H，作为共氢体
2.保持细胞内还原性谷胱甘肽的含量——蚕豆病：缺乏6-磷酸葡萄糖脱氢酶；
3生物转化中参与还原反应
        糖
三条分解途径：（各自在什么情况下发挥作用）
1. 无氧分解（ 机体缺氧时或某些特殊器官）      2. 有氧氧化      3.磷酸戊糖途径
血糖浓度维持主要靠以下三条途径：
  1． 糖原合成  2． 糖原分解  3．糖异生
糖原合成
   1．部位：肝脏  肌肉
   2．关键酶：  糖原合酶   （化学修饰：磷酸化后活性降低，去磷酸化后活性升高）
   3．葡萄糖的活性形式UDPG（又称活性葡萄糖）
   4．UTP、ATP参与葡萄糖的活化
      四种TTP参与的代谢，比如上述UTP、ATP参与葡萄糖的活化（dTTP不是高能化合物）
糖原分解
   1.肌肉不能分解糖原（缺乏葡萄糖6-磷酸酶）
肌糖原的一个葡萄糖残基，分解为乳糖，产生3个ATP
   2.关键酶：糖原磷酸化酶（磷酸化后活性升高，去磷酸化后活性降低）
糖异生
1．几个关键酶：丙酮酸羧化酶
               磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶
               果糖1，6二磷酸酶
               葡萄糖6-磷酸酶
血糖浓度的调节
主要受激素调节
1.升高血糖：肾上腺素、胰高血糖素     2.降低血糖：胰岛素
脂代谢
脂分为甘油三酯和类脂，后者可分为磷脂和胆固醇
甘油三酯的分解代谢
甘油三酯在脂肪酶作用下，分解为甘油和脂肪酸，甘油进一步代谢为磷酸二羟丙酮，磷酸二羟丙酮经糖异生成葡萄糖或者分解产生ATP
脂肪酸在胞内活化，生成脂肪酰辅酶A，在肉毒碱运输下，进入线粒体，然后进行β氧化，偶数碳原子数的脂肪酸生成乙酰辅酶A，奇数碳 原子数的脂肪酸生成丙酰辅酶A，
酮体
1．生成部位：肝脏
2．合成原料：乙酰辅酶A
3．酮体的组成：乙酰乙酸、β羟丁酸、丙酮
4．肝脏能合成酮体，但不能分解，必须运输肝外利用；脑组织不能利用脂肪酸，血糖浓度降低时，由酮体供能
脂肪酸合成
1．合成原料：乙酰辅酶A
2．合成部位：胞液
3．供H体：NADPH（由磷酸戊糖途径提供）
4．消耗ATP
5．初始合成16个碳原子的软脂酸，后转运至线粒体或微粒体，用于其它脂肪酸的合成
必需脂肪酸：亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸
脂肪酶是甘油三酯分解的限速酶，受素激调节，又被称为激素敏感的脂肪酶
磷脂
某些磷脂分解产物可以作为第二信使：cAMP、cGMP、Ca2+、IP3、DG、Ceramide
CTP参与了磷脂的合成
胆固醇
合成代谢
     1．原料：乙酰辅酶A     2．关键酶：HMGCoA还原酶
分解代谢
   1．主要去路为合成胆汁酸与胆汁酸盐   2．生成类固醇激素   3．转化为1，25二羟维生素D3
脂蛋白  
        合成蛋白        组成特点        功能
CM        小肠        甘油三酯        转运外源性甘油三酯
VLDL        肝脏        甘油三酯        转运内源性甘油三酯
LDL        VLDL代谢生成        胆固醇        转运胆固醇
HDL        肝脏        载脂蛋白        胆固醇的逆向转运

生物氧化
能量生成两条途径：
1.        底物水平磷酸化，（3个反应）
2.        氧化磷酸化（呼吸链）
  呼吸链的组成
1．组成成份
2．生成ATP的部位
3．P/O比值：每消耗1mol氧，所消耗磷原子数
4．NADH脱氢生成3个ATP
5．FADH2生成2个ATP
   呼吸链的排列顺序
呼吸链的调节
1.        ATP/ADP比值，比值升高时，抑制氧化磷酸化，降低时，**氧化磷酸化
2.        激素调节：甲状腺素浓度增加，导致钠钾泵活性增加，ATP消耗增加，ATP/ADP的比值下降，氧化磷酸化增加；ATP生成增多，ATP/ADP的比值增加
3.        抑制剂
（1）        呼吸链阻断剂（一氧化碳、氢化物）
（2）        解偶联剂（二硝基苯酚）
（3）        氧化磷酸化抑制剂
能量的贮存形式：  磷酸肌酸
高能化合物主要是以下8种：
1，3二磷酸甘油酸
磷酸烯醇式丙酮酸
乙酰辅酶A
磷酸肌酸
ATP、GTP、CTP、UTP
物质间的相互转变
  1.糖转变为甘油三酯
（1）        葡萄糖转变为乙酰辅酶A，为脂肪酸合成的原料
（2）        葡萄糖转变为磷酸二羟丙酮，进一步转化为甘油
（3）        葡萄糖经磷酸戊糖途径生存NADPA，
（4）        葡萄糖分解产生ATP提供能量
   2.甘油三酯转变为葡萄糖
（1）        甘油三酯在脂肪酶作用下，生成甘油和脂肪酸
（2）        甘油可以转变为磷酸二羟丙酮，经糖异生途径转变为葡萄糖
（3）        奇数碳原子的脂肪酸，可以转变为丙酰辅酶A，然后在羧化酶作用下，生成琥珀酰辅酶A，后者进一步转变为草酰乙酸，最后生成葡萄糖；偶数碳原子的脂肪酸，生成产生乙酰辅酶A，不能转变为葡萄糖
蛋白质代谢
蛋白质的营养价值：所含必需氨基酸的种类和数量
必需氨基酸：共8种
蛋白质的互补作用
氨基酸的分解代谢（主要为脱氨基）
  1.氧化脱氨基（谷氨酸）
2.转氨基（转氨酶，辅酶为磷酸吡哆醛）
3.联合脱氨基是最主要的脱氨基方式
氨基酸的分解代谢主要产生氨气和α酮酸
α酮酸有三条去路
    1.氨基化为相应的氨基酸
2.转变为糖或酮体（生酮氨基酸和生糖氨基酸）
3.分解供能
谷氨酸脱氨基为α酮戊二酸，后者经三羧三循环后，可以生成葡萄糖
天冬氨酸脱氨基转变为草酰乙酸，后者进一步转变为葡萄糖
丙氨酸可以转变为丙酮酸，进一步转化为葡萄糖
氨气的代谢
1.来源  
（1）        肾脏，谷氨酰胺在谷氨酰胺酶作用下， 生成谷氨酸和氨气
（2）        肠道  尿素在肠道细菌尿素酶的作用下，生成氨气
（3）        氨基酸的脱氨基作用，（血氨的主要来源）
2.运输
（1）通过谷氨酰胺（氨气的解毒运输及贮存形式）
（2）丙氨酸葡萄糖循环
3.去路
    （1）肾脏
（2）肝脏合成尿素：鸟氨酸循环
尿素合成               008-1
   1.部位：肝脏
   2.氮的来源：一个氮来源氨气，一个氮来源于天冬氨酸
   3.鸟氨酸，瓜氨酸不是组成蛋白质的氨基酸
肝性脑病的生化机理
个别氨基酸的代谢
1.脱羧（γ氨基丁酸，组胺、5-羟色胺、精眯、精胺的来源及其作用）
2.一碳单位
（1）        概念
（2）        载体：四氢叶酸（FH4）
（3）        可生成一碳单位的氨基酸：四种
（4）        功能：参与核苷酸的合成代谢
3.含硫氨基酸
  （1）蛋氨酸转变为S腺苷蛋氨酸（SAM）：体内活性甲基的供体
  （2）半胱氨酸转变为PAPS：体内活性硫酸根的供体
4.芳香族氨基酸
  苯丙氨酸羧化酶缺乏导致苯丙酮尿症
  酪氨酸酶缺乏导致白化病
5.支链氨基酸（一般了解）
核苷酸代谢
以合成代谢为主
                          从头合成  (1)元素的来源
                                    (2)合成的前体：IMP，由IMP转化为AMP时由GTP调控，由IMP转化为GMP时，由ATP调控
嘌呤核苷酸                补救合成：概念，关键酶  腺嘌呤磷酸核苷转移酶，次黄嘌呤：鸟嘌呤磷酸核苷转移酶，缺乏时，患者自毁容颜综合征
              2.NDP在还原酶的作用下转化为dNDP  ，注意为二磷酸水平上转化。
              3.抗代谢物的药物：(1)为何种类似物
                                (2)机理
              4.分解代谢：产物为尿酸，痛风症，别嘌呤醇
嘧啶核苷酸：分解产物为β丙氨酸和CO2、NH3



DNA**：1.过程：解旋酶和拓朴酶，解链酶，单链DNA结合蛋白，引物酶，DNA聚合酶，RNA酶，DNA连接酶，前导链，冈崎片段
           2.（1）特点：半保留**
（2）方向性：5′→3′端
（3）酶或蛋白因子的作用顺序
（4）主要酶、DNA聚合酶分为三类：αβγ，各类的作用
（5）引物酶的本质为RNA聚合酶
（6）凡是DNA合成都需要引物，凡是RNA合成都不是需要引物
（7）原料：dNTP  
（8）模板DNA. 产物是DNA
（9）“冈崎片段”
端粒酶：组成：1.RNA+酶蛋白，RNA为模板
              2.本质是逆转录酶
3.活性是存在于增殖旺盛的细胞中
损伤修复：
切除修复过程
反转录过程
mRNA在反转录酶的作用下，以dNTP为原料，合成与mRAN互补的DNA（CDNA）
CDNA的概念：包含mRNA信息
基因组DNA：包含整个信息
大的考点
  1.比较原核生物和真核生物的DNA**差异
  2. 简述切除修复过程
3.肿瘤病毒致癌的机制
转录
真核生物转录过程不清楚，以原核生物转录为过程来讲解
RNA聚合酶全酶：α2ββ′δ，δ因子识别启动子
  1.不对称转录
  2.5′→3′
3.主要酶：RNA聚合酶，α2ββ′δ为全酶，α2ββ′为核心酶
4.凡是RNA合成不需要引物
5.NTP（注意组成RNA的核苷酸为NMP）
6.模板是DNA
产物是RNA
转录后加工：原核生物的RNA是不需要加工的，是因为原核生物的DNA是**的，都是编码蛋白的，而真核生物学的DNA是断裂基因，需要加工。
mRNA:1.加帽，加尾
      2.剪切：外显子是编码蛋白的DNA序列，转录且翻译内含子不编码蛋白，转录但不翻译
      3.编辑：RNA的编辑是指转录后在RNA中加入或删除核苷酸，从而导致遗传信息改变。
tRNA和rRNA加工较为次要

蛋白质的合成
mRNA的作用：作为模板，三个核苷酸作为一个密码子编码一个氨基酸
密码子特点：1.起始密码子为AUG，编码蛋氨酸，终止子为UAA、UAG、UGA，不代表任何氨基酸
            2.连续性     3.简并性     4.通用性
tRNA：氨基酸先活化，形成氨基酰tRNA,摆动性
rRNA：与核糖体结合，为蛋白质合成提供场所
大题：原核与真核生物蛋白合成的异同点
蛋白质合成的特点：
  1.所需的因子：起始因子、延长因子、终止因子  2.特点：多聚[根据相关法规进行屏蔽]白体  3.方向性  NH2→COOH端
  4.主要酶：转肽酶   5.合成的模板:mRNA    6.原料：氨基酸   7.产物：多肽链  
8.GTP供能：蛋白质合成是一个耗能的过程
蛋白质加工：一级结构 水解
            高级结构  亚基聚合、二硫键形成
考点：简述蛋白质加工有哪些？
据蛋白质加工来设计前物来抑制细菌
分泌蛋白：1.[根据相关法规进行屏蔽]白体附着在粗面内质网上
2.是否N端有一个分泌信号时
分泌过程：
题：从各个方面比较**、转录、蛋白合成差异
DNA无加工,有修饰,是可逆的
RNA和蛋白质合成后有加工,为不可逆的
基因表达调控
一、基因表达概念
   转录和翻译的过程
rRNA和tRNA的生成也属于基因表达，越来越多的基因在RNA水平就有功能，不需要翻译成蛋白，体内SnRNA的生成也属于基因表达
二、特点
1.时间特异性（阶段特异性）有些基因严格按照时间特异性开启或关闭，如甲胎蛋白、血红蛋白，注意为同一基因
2.空间特异性（组织特异性）
三、表达方式
管家基因：概念：1.表达对细胞生命至关重要
                2.很少受外界的环境影响
                3.几乎在各个组织细胞均表达
                4.在细胞发育的各个阶段都表达
奢侈基因:
       1.对细胞生命不是至关重要
       2.受外环境影响大，外界环境使其表达升高，称为可诱导基因；外界环境使其表达降低，称为可阻遏
       3.并非所有组织都表达
       4.并非各个阶段都表达
管家基因与奢侈基因表达相互调控
基因表达调控
基因表达概念：
基因转录为mRNA前体，经加工为成熟mRNA，mRNA经过翻译成多肽链，多肽链经加工成为有功能的蛋白质，上述每一个步骤都有调控，但转录水平的调控是关键。
转录的要素：
   1.DNA调节序列：结构基因上游一些对基因转录进行调节的序列
                   保守序列、顺式作用元件（概念）
   2.转录因子：顺式作用元件一般多为转录因子的结合位点，只有两者结合才能调控转录，
             转录因子发挥作用有二种方式：DNA蛋白质相互作用；蛋白质与蛋白质相互作用
             反式作用因子的概念
   3.RNA聚合酶：TATAbox与TFIID结合，然后其它转录因子结合上去并招募RNA聚合酶，形成转录起始复合物
                SP1与GCbox结合，可使RNA聚合酶活性增加
基因表达的时空特异性的物质基础是转录因子活性的差异
原核生物的基因表达调控
    1.RNA聚合酶的种类及组成
    2.通过操纵子模型实现调控：操纵子的概念、多顺反子的概念
      乳糖操纵子模型：1.阻遏蛋白由I基因合成，介导负性调节
2.阻遏蛋白与操纵基因结合
3.RNA聚合酶与启动子结合
4.多顺反子结构
5.转录与翻译与偶联进行
    3.以负性调节占主导
真核生物基因表达调控
    基因组结构特点：1.单顺反子
2.重复序列
3.基因不连续性、断裂基因
基因表达的特点：1.RNA聚合酶与原核的差异
                2.活性染色质的变化（染色体重塑）
                                  (1).对DNA酶高度敏感
                                  (2).拓扑结构的变化
                                  (3).碱基修饰的变化（甲基化水平）
                                  (4).组蛋白修饰增加（乙酰化）
                3.正性调节占主导  单顺反子结构
                4.转录与翻译分隔进行
真核生物的DNA调节序列：
1.启动子的概念与特点：
(1).位于5′端   (2).基因转录所必需  (3).具有方向性  (4).近距离作用  (5).对调节的基因无特异性
2增强子的概念与特点
(1).可作用于基因的上、中、下游 (2).非基因转录所必需，但缺乏时转录效率很低 (3).必须通过启动子才能发挥作用  (4).可近可远  (5).不具有方向性  (6).有组织器官特异性（与增强子结合的转录因子）
                         3.沉默子
转录因子的结构：DNA结合域、转录激活域
DNA重组技术
概念：应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质与载体DNA结合成一具有自我**能力的DNA分子——**子，继而通过转化或转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化因子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，即DNA克隆。
1．目的基因的获得：
     1.化学合成
     2.从cDNA文库中筛选
     3.从基因组文库中筛选
     4.PCR扩增目的基因：
   （1）.一个循环包括变性、退火、延伸三个步骤
   （2）.TaqDNA聚合酶，耐热
   （3）.影响PCR特异性的是退火温度，（由引物Tm决定）
2．载体的选择：质粒、腺病毒、逆转录病毒、轮状病毒、噬菌体、酵母人工染色体
3．切：限制性核酸内切酶：
   1.识别双链DNA上的特异序列并在识别位点或周围能将双链DNA切割开来的一类核酸内切酶
   2.识别序列多为回文结构
4．筛选：最直接的方法为分子杂交
5．表达载体
细胞信号传导
膜受体的信号传导途径主要是G蛋白介导，G蛋白通路的具体过程，常见的第二信使及其下游激活蛋白
核受体的信号传导：配体多为脂溶性，受体本身为转录因子
常见的第二信使：cAMP激活PKA；cGMP激活PKG；IP3与肌浆网受体结合，使Ca2+释放至胞液；Ca2+与DG共同激PKC；Ca2+还可以与钙调蛋白结合
肾上腺素调节糖脂代谢的信号传导途径（具体见教材）
癌基因、抑癌基因与生长因子
癌基因的概念
  1.调节正常组织、细胞的生长、分化
  2.在正常细胞表达
  3.癌基因产物分布于各个亚细胞结构
  4.异常表达时细胞会癌变
抑癌基因的概念
生长因子：对细胞的生长和分化具有调节作用的一类多肽类物质
肝胆生化
1.在物质代谢中的作用
2.在生物转化中的作用
概念；生物转化的反应类型；UDPGA；氧化反应、结合反应
3.在胆色素代谢中的作用
  来源；代谢途径、Y蛋白、Z蛋白、新生儿黄疸（Y蛋白缺乏）、直接胆红素，间接胆红素
4.在胆汁酸代谢中的作用
  胆固醇转变而来；限速酶；游离胆汁酸；结合胆汁酸；初级胆汁酸；次级胆汁酸；胆汁酸功能
血液生化
1.非蛋白氮（NPN）的概念；尿素为主要的NPN
2.红细胞的代谢：
1).红细胞代谢的特点 2).血红素合成的原料，限速酶
  人类基因组计划
1．        人类基因组计划的研究内容
2．        后基因组时代的研究内容
常用分子生物学技术
1．        Southern Blot：检测DNA
2．        Northern Blot：检测RNA:D

3****3

谢谢了!~

m****n

不错!谢谢了

七**星

看到对大家有用心理好高兴,就是觉得这篇讲义挺精练的,适合生化复习

s****7

这里很多东西必须有积分才可以看，所以能看到你发的内容很高兴，谢谢了。