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[各科交流] 一起来看看细胞培养中的实验tips

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发表于 2018-6-27 14:34 | 显示全部楼层 |阅读模式

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经常有小伙伴们跟我说,在做细胞培养实验中,老是出现很多问题,有时候还忘记看说明书了,有时候不知道该怎么操作和注意什么问题,现在,我们一起来看看细胞培养中的实验tips。
关于血清
血清的热灭活在免疫分析时可以灭活补体系统。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。热灭活是以往公认的操作步骤,并没有确凿的证据说明这样做是有益的。相反,对大部分细胞而言,GIBCO和HyClone都不推荐热灭活血清。因为加热可能使血清中的沉淀增加,使您误以为污染。
如何避免血清中沉淀物的产生?
1. 解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。并随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
2. 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
3. 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
4. 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
培养基的使用
细胞培养基的储存条件是2-8摄氏度。如果细胞培养基不小心被冻,您应该融化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生,培养基可以正常使用,如果出现沉淀,可能只能丢弃这些培养基。
★贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基,可能在放置几天后颜色变紫。这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时,碳酸氢纳导致了pH值的上升。您可以在使用前松开瓶口,在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟,来校正溶液的pH值(确定松开瓶口以保证气体交换)。
★当在无血清培养基中添加抗生素时,降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下,抗生素不被灭活,可能对于细胞达到毒性水平。
★一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
1、细胞培养添加剂
大部分添加物和试剂最多可以冻融3次,如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,将会影响它的性能。
★贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液只能使用一周。胰蛋白酶在4℃就可能开始降解,如果在室温下放置超过30分钟,就会变得不稳定。先达基因支原体检测试剂盒提供了一种快速简单灵敏的细胞支原体检测方法,能检测的支原体种类超过130种两步操作,20min出结果先达基因支原体检测,从未如此简单
细胞复苏
在订购的细胞到达后,应立即复苏,如果培养基还没有准备好,可将其放入液氮中,尽快复苏。千万不能放置在-20或-80℃的冰箱内。
★细胞复苏往往是比较容易出问题的步骤。请在订购细胞时就向供应商索取详细的复苏步骤,并仔细阅读。有些供应商就不推荐在复苏时离心,对此类细节,应特别留意。

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