师兄独家收藏的细胞培养小技巧

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细胞培养的路上，有多虐心就有多少要注意的地方。大家擦干眼泪，听师兄几句话。希望我所说的能帮助你细胞培养的路上，少一点污染，多一点快乐。

细胞方面

1. 买细胞要去靠谱的地方买，比如 ATCC 官网或者丁香通。一般上面会有针对细胞的介绍，这样培养之前可以了解细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。

2. 不管是买的细胞，还是别人惠赠的细胞，刚拿到手赶紧的做两件事：检测是否有支原体污染；迅速扩增冻存，冻存细胞复苏后第二天最好更换一次培养基。

3. 发现细胞有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下，先达基因支原体检测试剂盒提供了一种快速简单灵敏的细胞支原体检测方法，能检测的支原体种类超过130种，两步操作，20min出结果。先达基因支原体检测，从未如此简单。

4. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢，比如 BT474，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要在培养细胞的过程中多多摸索。

5. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护。胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住，是每天。

操作方面

1. 最好不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。自己的东西自己包自己烘干。枪头什么的只要有可能污染就换。

2. 严格无菌操作。操作台一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精消毒一遍，稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。

3. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，记得要勤换。身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。比如实验台，又比如培养箱内部。培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。

4. 细胞房日常的值日清洁是必须的，此外还要定期熏蒸。晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。最好的是同一时间就你一个人在细胞房养细胞。

5. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来。刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。