影响血细胞分析仪准确性的因素探讨

医****家

一、标本处理方法对结果的影响

1、采血部分

血液分析一般要求用抗凝的静脉血，尽可能不用末梢皮肤穿刺采血。因为不同部位皮肤穿刺血的细胞成分及细胞与血浆的比例常不一致，与静脉血的差别更大 。从技术角度讲，毛细血管采血量较少，全自动的血液分析仪需血量较大，不易采到足够量，更不能在需要的时候进行重复检查，因此除了少数不易取静脉血如婴儿、大面积烧伤的病人及某些需要经常采血检查的病例，如白血病、肿瘤放疗或化疗病人外，均应采用静脉血检测。

2、容器的选择

存放抗凝血的容器应尽量采用密闭式的，以防止水分蒸发或环境污染等方面的影响。为了减少对血小板分析的影响，应使用塑料试管，采血后应立即混匀。如果采用玻璃制品应首先对容器进行硅化处理，以防止血小板黏附，造成血小板计数的减少。目前在发达国家普遍使用真空采血系统，这一系统使标本在采血和测试期间完全与外界隔离，避免空气或异物污染血液，也防止发生溶血，提高检测准确性，同时也防止采血及检验人员因直接接触血液而受到感染的危险。

3、抗凝剂

国际血液标准化委员会（ISCH）推荐使用的抗凝剂是EDTA二钾，含量规定为1.5-2.2mg/ml血。此抗凝剂不影响白细胞计数及大小，对红细胞形态影响也最小，并且可以抑制血小板的聚集。EDTA二钠用于血常规检查与EDTA二钾抗凝血的结果相比无明显变化，但其溶解度较低，抗凝速度慢，不适合末梢血的抗凝。

需要注意的是EDTA二钾可以使红细胞体积轻度膨胀，采血后短时间内MPV非常不稳定，半小时后方趋于平稳。枸橼酸盐类抗凝剂对MPV及其他凝血因子影响极小，可用于血小板的分析。

4、稀释标本

在使用半自动血液分析仪时，血液需要经过预稀释以后方能检验，应特别注意稀释溶血现象。稀释溶血是指血液经高倍稀释后，随着放置时间的延长血细胞自行溶解的现象。所以血液稀释后应尽快测定，以避少数量的减低。

5、溶血标本对分析结果的影响

由于标本的处理不当，例如采血不顺利、剧烈震荡等，可以造成标本试管内溶血。溶血严重的标本可以使红细胞和血球压积下降、血红蛋白相对增加，导致MCH和MCHC增高，而平均红细胞体积正常。这一结果可以使临床医生作用错误的判断，造成不良后果。所以对于溶血的标本，应重新采集标本后测定。

6、存放时间对结果的影响

抗凝全血在室温的条件下进行仪器测定，红细胞、白细胞和血小板各项指标可以稳定24个小时，白细胞分类可稳定6-8小时，血红蛋白可稳定数日。但如果在显微镜下进行白细胞分类，两小时后粒细胞形态即有变化，所以如果需要做显微镜形态学检查，应及早推制血片。虽然4摄氏度条件可延长血液储存期，但血小板不宜在低温下储存，会影响计数和体积，因此如不能及时检测血液应在室温下保存。

很多文献报道EDTA盐抗凝的静脉血，在采血后的一小时内检测MPV不稳定，血小板体积逐渐增高，可增大20%左右，一小时后趋向平稳，在1-6小时内变化小于3%。这是由于血液与EDTA盐抗凝剂混合后，血小板形状由凹形变为球形，体积增大的原因。所以为了结果的准确性，应该在一小时后进行测定。

我们发现用EDTA抗凝的末梢血也应至少在15分钟以后进行测定，因为在这段时间内有些标本血小板暂时的聚集现象，使血小板计数假性减少，这不仅影响血小板其它指标的准确性，也造成白细胞计数有所增高。取血后立刻检测，标本的血小板和白细胞体积分布直方图也是异常的，放置一段时间后再测定就可得到分布正常的直方图。

7、溶血剂的用量及溶血时间

全自动血液分析仪可以控制溶血剂的加入量及溶血剂作用时间。但在使用半自动血细胞计数仪进行血细胞计数时，需要在血液预稀释后人工加入溶血剂，溶血以后再进行血细胞计数和分类计数，正确掌握溶血剂用量及溶血时间非常重要。如果加入量不足或加入后放置时间过短，可以造成溶血不完全，使未溶解的红细胞计入白细胞中，造成白细胞假性增加。溶血不完全也可影响血红蛋白的准确性。如果加入溶血剂量过多或放置时间太久白细胞明显变形，使白细胞直方图异常，白细胞分类计数结果不准确，甚至不能进行分类计数。二、生理状态及其它因素对实验结果的影响

1、生理状态

除很多病理情况下可引起血细胞计数的变化外，很多生理状态也可以引起各项参数的变化。如妊娠的妇女和新生儿白细胞总数明显增多；炎热和寒冷常引起一过性白细胞总数增多；大量吸烟的人因血液一氧化碳增高其血红蛋白含量可以明显增加；每天不同时间白细胞总数也有一定差异。

2、仪器的影响

血液分析仪对环境要求较高，应远离放射、核磁、放疗加速器等大型医疗设备科室，以防止电信号的干扰。如果实验室的电压不稳，应安装稳压装置，防止仪器产生大量的电噪音，干扰血小板计数结果。

对一起的吸样针、液体管道、计数池等应定期用酶清洗剂或5%次氯酸钠进行彻底清洗，防止蛋白堆积。如果计数小孔周围有蛋白堆积，可影响细胞体积测定，造成MCV增高。如果血红蛋白比色池污浊可影响血红蛋白定量结果。

3、试剂因素的影响

目前国内有一些厂家能生产具有白细胞分类功能的血液分析仪。国外厂商均要求使用与其配套的稀释液和溶血剂，甚至对清洗剂也有一定的要求，增加试验成本。但是如果随意改用其它厂家的试剂或使用自己配制的试剂，虽然对红细胞、白细胞和血小板的计数不会有明显的影响，但是对白细胞分类计数和细胞体积的测定的影响会很大，有些还会影响血红蛋白的测定，使得多项血细胞分析指标不准确，如MCV、HCT、HGB、MCH、MCHC、RDW、MPV、PVT、PDW血细胞分类及其异常警告的提示等。

因为绝大多数血液分析仪采用电阻法进行细胞计数和体积测定，原理是基于细胞在测试系统中产生的脉冲大小与仪器设定的阀值比较而得出的数据，脉冲大小除与细胞体积有关外，还与溶血剂的种类、稀释液的渗透压、离子强度、电导率、仪器出厂时固定的孔电压和脉冲的增益率等有关。所以为得到准确的结果，原则上应使用原仪器的配套试剂。如果采用自配试剂测试，通过验证，其所得的数据结果必须与用原装试剂结果一直，而且各种细胞体积分布图形也必须完全一致。