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[法规制度] 寨卡病毒实验室检测技术方案

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发表于 2016-3-2 15:05 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式

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寨卡病毒实验室检测技术方案.doc (13.5 KB, 下载次数: 0)

   
寨卡病毒(Zika Virus)属黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus),呈球形,直径约为40-70nm,有包膜。基因组为单股正链RNA,长度约为10.8Kb,可分为亚洲型和非洲型两个基因型。
    寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应,目前主要采用病毒核酸检测。
    一、检测对象
    (一)疑似和临床诊断病例
    (二)伊蚊成蚊和幼虫。
    二、样本采集、保存和运输
    (一)病例标本采集。
    对怀疑感染寨卡病毒的患者,推荐采集血清标本开展检测。
    用无菌真空干燥管,采集患者非抗凝血5mL,及时分离血清,分装2管,保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内,标记清楚后低温保存,其中1管用于现场实验室检测,1管用于上级疾病预防控制机构复核。
    对病例应尽可能采集双份血液标本,两份标本之间相隔14天为宜,住院病例可于入院当天和出院前1天各采集一份。
    (二)蚊媒标本采集。
    疫点内采集的伊蚊成蚊及幼虫,分类鉴定后,填写媒介标本采集信息表,按照采集地点分装,每管10-20只。
    (三)标本保存、运送。
    如标本能够在24小时内开展实验室检测,应将标本置于2-8℃保存;如能在7天内开展检测,应将样本置于-20℃保存;如需保存7天以上,应将样本置于-70℃以下。
    标本运送时采用低温冷藏运输,避免冻融,样本运输应遵守国家关于三类病原体的相关生物安全规定。
    三、检测方法
    寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应,目前主要采用病毒核酸检测。
    开展蚊媒寨卡病毒检测时,对捕获的伊蚊成蚊或幼虫进行病毒核酸检测。
    开展寨卡病毒实验室检测时,应同时考虑登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒实验室检测应按照相应的技术指南开展。
    (一)临床标本检测。
    1.病原学检测
    病原学检测主要适用于急性期血液标本,一般认为发病7天内检测阳性率高。
    (1)核酸检测:采用荧光定量RT-PCR方法,是目前早期诊断寨卡病毒病的主要检测手段。
    (2)病毒分离:将标本接种于蚊源细胞(C6/36)或哺乳动物细胞(BHK21Vero)进行分离培养,出现病变以后,用检测核酸的方法鉴定病毒。也可使用乳鼠脑内接种进行病毒分离。
    2.血清学检测
    (1)血清特异性IgM抗体:发病3天后可检出病毒特异性IgM抗体,但发病7天后检出率高。可采用ELISA、免疫荧光等方法检测。IgM抗体阳性,提示患者可能新近感染寨卡病毒,但寨卡病毒IgM抗体与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等黄病毒有较强的交叉反应,易于产生假阳性。
    (2)中和抗体:采用空斑减少中和试验方法检测。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高,且排除登革、乙脑等其他常见黄病毒感染,可以确诊。
    (二)媒介标本检测。
    1.标本处理
    将分类后的伊蚊成蚊或幼虫,按照采集地点,每1020只为一份进行研磨处理。
    2.病毒核酸检测
    用RT-PCR的方法进行寨卡病毒核酸检测

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