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基本概念 所谓酶活力,是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的测定实际上是测定一个被酶所催化的化学反应的速度。酶反应的速度可以用单位时间反应底物的减少或产物的增加来表示,酶反应的速度愈快所表示的酶活力愈高。
测定酶活力,可用物理法,化学法或酶分析法等方法。常用的方法有:第一,在适当的条件下,把酶和底物混合,测定生成一定量产物所需的时间,此即终点法。第二,将酶和底物混合后隔一定时间,间断地或连续地测定反应的连续变化,如吸收度的增加或减少。第三,将酶与底物混合后,让其反应一定时间,然后停止反应,定量测定底物减少或产物生成的量。后两种方法称为动力学法或反应速率法:按取样及检测的方式可称为取样测定法或连续测定法。
酶的活性单位(国际单位IU):是指在25℃下,以最适的底物浓度、最适的缓冲液离子强度以及最适的pH值诸条件下,每分钟能转化一个微摩尔底物的酶量定为一个活性单位。酶的比活性即定为一毫克酶的活性单位。
在实际工作中,为了简便,人们往往采用各自习惯沿用的单位,有时甚至可直接用测得的物理量表示,例如,以吸收度的变化值(AA/At)表示酶单位。其它衍生单位:酶溶液的浓度通常以单位数/毫升表示;在估计酶制剂纯度时则用比活力,即以单位重量的酶蛋白中酶的单位数[(单位数/毫克蛋白(或氮)]表示;在酶高度纯净,而且酶的分子量已知,甚至每个酶分子上的活性中心数目也已知时,还可采用分子活力或转换率表示。它们分别表示在最适条件下每个酶分子或每个活性中心每分钟催化底物分子(或相关基因)转化的数目,这种单位的意义是它可用以进行催化效率的估计和比较。 |
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