用分子检验识别急性移植排异反应

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    肾移植的急性排异（AR）增大了移植肾慢性损伤和衰竭的风险，所以急需无创分子测定来改进疾病诊断和病人监护。
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    BioMark HD和EP1平台拥有数字阵列集成流控电路，可实现定量实时聚合酶链反应尽管用了免疫抑制疗法，大约15%到20%的肾移植患者仍会发生急性排异，血清肌酐是肾功能的标记物，它水平的升高往往预示着排异，然后进行肾活组织检查，确认是否发生了排异。
    美国加利福尼亚大学旧金山分校的科学家与来自多国的科学家合作，在2005年至2012年间收集了美国、墨西哥和西班牙的八座肾移植中心438名成人和儿童肾移植患者的558份外周血样本，以开发定量实时聚合酶链反应（qPCR）检验产品。他们用急性排异或无急性排异（由肾活组织检查确定）成人的143份样本开发了这种检验产品，然后用三组患者完成并确证该检验产品。
    用基于柱方法的试剂盒提取总核糖核酸（RNA），在安捷伦科技公司（Santa Clara, CA, USA）的2100生物分析仪上用RNA 6000纳米芯片实验室试剂盒测量RNA完整度。在96.96动态阵列和芯片上执行微流控qPCR,通过HX IFC控制器预先加载该芯片并在Fluidigm公司（South San Francisco, CA, USA）的BioMark qPCR平台上执行qPCR.
    科研小组评估了43个基因中10个基因的差异表达，选择已确证的同样10个基因作为标记物，用标准化的临床实验样本收集和处理程序诊断外周血中急性排异的。为了提高143份成人样本的急性排异诊断准确度，用多种统计建模方法又找到7个基因，提高了基因组合鉴别急性排异与非急性排异样本的准确度，所以最终的选择是17个基因。该测定名为kSORT,能区分急性排异风险高和风险低的患者。无论任何年龄、移植后经过的时间以及样本源，kSORT测定都能够检测血液中的急性排异，无需额外的数据归一化。
    该研究的论文发表于2014年11月11日的《公共科学图书馆》杂志《医学》分册上。作者总结说，kSORT测定是一种简单、稳定、可用于临床的血液检验。他们正在用 kSORT进行一项前瞻性观察实验以及另一项前瞻性随机双盲临床干预实验，以确定移植后如何继续应用kSORT,辅助现有的临床规程指南分类病人的免疫风险、药物载荷和活检要求。