白藜芦醇对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的抑制作用及其机制

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白藜芦醇对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的抑制作用及其机制
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研究
何婷, 管旭, 杨可, 肖堂利, 徐新丽, 赵景宏
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重庆市第三军医大学新桥医院肾内科 400037
目的 白藜芦醇是一种天然的具有生物活性的抗氧化剂， 已有体内研究证实它对
糖尿病肾病具有良好的保护作用，但目前对其具体保护机制并未阐明。本研究以
人近端肾小管上皮细胞（HK-2）为实验对象，探讨白藜芦醇对高糖诱导肾小管上
皮细胞发生上皮-间充质细胞转分化 （epithelia-mesenchymal transition， EMT）
的抑制作用及机制，并且进一步揭示糖尿病肾小管-间质纤维化以及糖尿病肾病
的发生机制，为延缓糖尿病肾病的进展提供了新的防止思路。
方法 体外培养 HK-2 细胞，分为正常对照组（NG，5.5mmol/L）、高糖组（HG，
30mmol/L）、白藜芦醇组（RES，10μmol/L）、高糖（30mmol/L）+白藜芦醇（10
μmol/L）组（HG+RES）、二苯基碘组（DPI，10μmol/L）、高糖（30mmol/L）
+DPI（10μmol/L）组（HG+DPI），倒置显微镜下观察高糖孵育 48h 后对细胞形
态的影响，免疫荧光检测上皮细胞标志物角蛋白（cytokeratin）及间充质细胞
标志物波形蛋白（vimentin）的表达变化，Western blot 检测上皮细胞标志物 E
钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标志物 a 平滑肌肌动蛋白（a-SMA）的表
达变化以及 NADPH 氧化酶亚基（NOXs）的表达变化，DCFH-DA 法检测细胞内 ROS
水平。
结果 与正常对照组相比，高糖处理后的 HK-2 细胞失去原有形态，呈长梭形改
变，且细胞间隙增大，上皮细胞标志物 cytokeratin 及 E-cadherin 表达明显减
少，而间充质细胞标志物 vimentin 及 a-SMA 表达明显升高(P</span>＜0.01)，
说明高糖能诱导 HK-2 细胞发生 EMT。同时高糖能够诱导 HK-2 细胞 ROS 产生明显
增多(P</span>＜0.01)， NADPH氧化酶亚基NOX1、 NOX4表达明显升高(P</span>
＜0.01)，NOX2 则无明显变化，而加入白藜芦醇或 NADPH 氧化酶抑制剂 DPI 预
孵育后，均能显著抑制高糖诱导的 HK-2 细胞 EMT 和 ROS 产生增多(P</span>＜
0.01)，且二者效果相似，此外白藜芦醇可以明显抑制高糖诱导的 NADPH 氧化酶
亚基 NOX1 以及 NOX4 表达升高(P</span>＜0.01)。
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结论 白藜芦醇可能通过抑制 NADPH 氧化酶亚基 NOX1 和 NOX4，从而减少肾小管
上皮细胞 ROS 的生成，最终抑制高糖状态下 HK-2 细胞 EMT 的发生。