Ⅰ型糖尿病造模经验总结分享

十***五

自己近段时间在做STZ糖尿病大鼠实验，现在将实验经验总结分享如下，有不同观点或者有不同做法的请大家多多指教。
造模方法
（1）链脲佐菌素（Streptozotocin）诱导大鼠糖尿病模型方法
将大鼠禁食12h,按60mg/kg体重腹腔注射STZ,每日1次，连续2次，成功制备Ⅰ型糖尿病大鼠模型，并且该模型具有高血糖、体重减轻、多饮多食多尿的特点，与临床Ⅰ型糖尿病吻合；但在此实验中，若造模组只腹腔注射STZ一次，并给予高热量饲料饲养12周，则可制备Ⅱ型糖尿病动物模型，且按该法制备出的模型具有超重、糖耐量减低、血脂升高、血清胰岛素升高及胰岛素受体结合力降低伴胰岛素抵抗的特点，类似于Ⅱ型糖尿病病人的临床特征。Ⅰ型糖尿病与Ⅱ型糖尿病动物模型的制备可能与STZ注射的剂量有关系：大剂量（常为120mg/kg）注射时，由于直接引起胰岛β细胞的广泛破坏，可造成Ⅰ型糖尿病模型；而注射较少量STZ时，由于只是破坏一部分胰岛β细胞的功能，造成外周组织对胰岛素不敏感，同时给予高热量饲料喂养，两者结合便诱导出病理、生理改变都接近于人类Ⅱ型糖尿病的动物模型。
（2）你还是采用腹腔的比较好！按65或是70给都可以。最好是给STZ后7天开始测定血糖分组为好，这样血糖已经稳定了！
我给我的一个朋友用ALLOXAN,尾静脉。大鼠，50mg/kg,全都死亡了！
给STZ前有的说禁食，有的说不用，但还是禁的好些，给STZ后，也不要立即给予食物，1小时后再给。还有腹腔注射的手法要正确！！给STZ要快，最好在冰水中冷却溶液！
（3）链脲霉素（STZ）诱导的高血糖动物模型
STZ水溶液不稳定，对小鼠的生物半衰期仅有5min左右，需要快速静脉注射。造型剂量犬50mg/kg,静注，可引起糖尿病，动物死亡率较高；如15mg/kg,连续3天也可。大鼠60-80mg/kg,iv或ip,小鼠100-200mg/kg,iv或ip.STZ诱导的高血糖动物模型一般不自发缓解。需要注意的是，给药时常把STZ溶解于0.1mol/L的柠檬酸缓冲液中，临用前配制。注射后72h血糖可稳定升高，有三多症状。血糖在11.1mmol/L以上可作为成功模型选用。造型时STZ应新鲜配制，分组时各组动物的平均血糖值相差不宜大于20mg/dl,血糖值升高不符合要求的动物应剔除。
（4）STZ是一种广谱抗癌药，曾用来治疗巨胰岛瘤。能破坏胰岛B细胞，大剂量可诱导1型糖尿病，小剂量反复注射可致2型糖尿病。
STZ造模：
大鼠（Sprague Dawley 或Wistar）一般是i.p. 50~60mg/kg,剂量太大死亡率高，如果打到160mg/kg以上基本上死光。
小鼠一般是i.p. 80mg/kg以上，可打到120mg/kg也挺好的。可耐受到160mg/kg左右，状态尚可。这是常见的KM种小鼠所用剂量。如果用C57BL/6J近交系小鼠（被毛褐色），据文献报道用30~40mg/kg就可以了，因其对STZ很敏感。
关于糖尿病模型成功的标准：文献报道有以造模五天或一周后血糖值高于11.1mmol/L（200mg/dL）或16.7mmol/L（300mg/dL）为标准的。
正常KM小鼠血糖值：常见为85~90mg/dL,可在60~170之间波动；
正常大鼠血糖值：常见为70~80mg/dL,可在50~135之间波动。
据上，我个人认为以血糖高于16.7mmol/L（300mg/dL）为标准较好。
关于禁食：
造模前禁食：可禁12h,16h,24h,我试了，禁16h比较好，禁太长老鼠易死。
检测前禁食：可禁12h或16h, 一定要禁彻底！因为高血糖老鼠一般会伴有脂质代谢紊乱，尤其是高甘油三酯，没禁好食血清中会有乳糜微粒（CM）增多，导致离心后血清几乎呈白色，极大地影响测定。
一个细节问题：禁食前要换垫料。因为老鼠在摄食时会把它弄到垫料里，如果不换它会吃垫料中的食物。
（5）链脲霉素糖尿病
适用实验动物：大白鼠，小白鼠，狗，猴和豚鼠
实验方法：由于链脲霉素的水溶液不稳定，对小白鼠的生物半衰期大约只有5分钟左右，因此最可靠的给药途径是快速静脉注射。对于狗，1次静脉注射剂量50mg/kg体重即可引起糖尿病，但半数以上的动物死亡，如果每天静脉注射15mg/kg体重，连续3天亦可引起糖尿病。大白鼠，1次静脉注射50mg/kg体重可以引起100%动物糖尿病。小白鼠对链脲霉素的敏感性较大白鼠低，通常致糖尿病剂量为175-200mg/kg体重。
提示
1.链脲霉素的理化性质：链脲霉素是从无色链霉菌属分离出来的一个广谱抗菌素。为无色固体，易溶于水，其水溶液在室温下极不稳定，可在数分钟内分解成气体，所以水溶液应在pH=4和低温下保存。
2.链脲霉素糖尿病特征：注射致糖尿病剂量的链脲霉素后，同注射四氧嘧啶一样血糖水平可以看到3个时相变化。但是不同于四氧嘧啶，注射链脲霉素后早期高血糖大约延迟45-60分钟才开始。这种延迟现象在禁食的小白鼠中表现不出来，而大白鼠则表现的很明显。链脲霉索引起的低血糖相比四氧嘧啶更严重，相应的致命性惊厥也就更多见。
3.链脲霉素的致糖尿病作用：链脲霉素也能选择性损伤胰腺β-细胞，其组织学改变和四氧嘧啶糖尿病相似。对四氧嘧啶致糖尿病作用有抵抗的豚鼠亦可引起糖尿病，链脲霉素引起的大白鼠糖尿病酮症和血清游离脂肪酸比四氧嘧啶糖尿病缓和的多，链脲霉素引起的小白鼠糖尿病不表现自发性缓解。
（6）我的造模方案，死亡率很低
1.选用Wistar大鼠40只。体重170-220g,月龄4-6周。饲以大鼠常规颗粒饲料（本院动物中心提供），自由饮水。实验动物饲养房室内通风良好。室温保持在18~22℃。大鼠正常喂养1周。
2、禁食12小时，尾静脉测空腹血糖，称体重。
3、使用链脲菌素（STZ）造模，购与莱博生物实验材料研究所。STZ临用前以0.1mol/L,pH4.2的柠檬酸缓冲液溶解配制成1%STZ溶液，按60mg/kg体重一次性腹腔内注射STZ,注射后给予充足饮水及食物。
4.、注射STZ后，每日给予充足饮水、食物，每日换垫料1-2次，保持干燥。
5、注射STZ后第1天、第7天、10天测空腹血糖，大于16.65mmol/l者为稳定模型，进入下一步实验。（资料显示稳定期一般10天以上）。
6、注射STZ十天内，雌鼠死亡2只，十天后，38只大鼠中血糖达标者36只，喂养3个月后，雄性大鼠血糖持续偏高，20只均在16.65mmol/l以上，雌性大鼠血糖不稳定，部分恢复正常。
结论：使用链脲菌素（STZ）造Wistar大鼠1型糖尿病模型，共有大鼠40只，死亡2只，成模36只，成模率90%.
（7）链脲佐菌素（STZ）为一种广谱抗菌素，具有抗菌、抗肿瘤的性能和致糖尿病的副作用 ,对实验动物的胰岛β细胞具有高度选择性的毒性作用 .STZ诱导的糖尿病因给药方式不同，其成模效果也有所差别。如采用小剂量分次给药的方法，则建立与人类Ⅰ型糖尿病表现相似的大鼠模型，如采用较大剂量一次性注射的给药方法，则建立与人类Ⅱ型糖尿病表现相似的大鼠模型，其原理可能与胰岛的损伤程度有关。因人类糖尿病中85%为Ⅱ型糖尿病，而且该方法具有用药量小，***简便，药物毒性小等优点。因此以一次性注射STZ造成Ⅱ型糖尿病大鼠应用最多，而选择一种成模率高的途径尤为重要。
我们实验室选择的是STZ,因为可以建立两种糖尿病模型，而四氧嘧啶就不好掌握1型与2型的控制，因为四氧嘧啶反复低剂量不能诱导糖尿病模型，只能使用大剂量。不过链脲佐菌素确实贵了点，但是还可以忍受吧，具体还要看实验室情况及试验要求而定。
动物体重
开始制备时体重不能太低，用200-250g的，用STZ成模率100%,死亡很少。如果已经成模，体重基本是负增长。
动物选择
（1）最好是选用雄性的，雌性的一些激素影响比较多。
（2）应该说雌雄可以各半，不过雄性容易造模，雌性除激素影响多外，还应该注意在实验时不要混入雄性，否则影响实验全部。
（3）我看的文献居多选雄性，雌雄混养，导致妊娠，影响实验，所以我也选用雄性SD大鼠。
（4）我在做糖尿病大鼠模型时发现，用STZ60mg/Kg,90%成模。雄性大鼠血糖持续偏高，比较稳定，三个月没问题。但雌性大鼠血糖先升高，在一个月左右开始下降，接近正常。持续约一个月，又开始升高，在第三个月时，有70%血糖高于16.7,如何解释此现象。（饲养环境等完全相同，测量方法也相同）。是否与体内雌激素有关？
1.该模型为1型糖尿病模型，临床意义没有2型糖尿病模型意义重大，有条件的话尽量做2型模型。
2.1型糖尿病大鼠以雄性成模率高，雌性成模率低。原因是性别差异对STZ敏感性不同，最好将雌性大鼠剔除。
3.我曾经做23只雄性大鼠全部成模，打药STZ之前空腹过夜。
（5）最好用大鼠做，因为小鼠对STZ的敏感性低。如果一定要用小鼠做，可以用昆明种小鼠，成功率较高，但要注意以下几点。
1、由于糖尿病小鼠抵抗力弱，饲养环境一定要控制好，要在SPF级动物房做。
2、给药后6~10小时有一个低血糖期，需要灌胃葡萄糖水。
3、实验过程要保证小鼠供水，确保小鼠24小时均能喝到水。
4、由于糖尿病小鼠多饮多尿明显，垫料很容易湿，所以每天需要换垫料2次。
5、建议参考徐淑云主编的《药理实验方法》，对STZ剂量进行摸索，且注意配制STZ时，临用时配制，用柠檬酸缓冲液在冰块上配制。
STZ造模剂量
（1）大鼠是50mg/kg左右，小鼠80-100mg/kg.每次实验前用少量动物预试。批号不同的STZ每次用量是不一样的。
（2）我做过，小鼠150mg/kg,,大鼠65mg/kg一次腹腔注射。
大鼠也可以用30mg/kg,连续三次腹腔注射。五天后测血糖，模型成功率80%.
（3）一般说来STZ剂量，注射STZ前禁食的长短与血糖呈线性关系！即STZ量越大，动物血糖越高，当然是在同等条件下：禁食时间一致，测定血糖的时间一致……
禁食时间延长，可以降低STZ的用量。否则一是动物血糖偏高，一是动物容易死亡。一般过夜禁食。
STZ比四氧嘧啶贵许多！！！所以一般我们用STZ 60mg/kg ip大鼠， 四氧嘧啶60~70mg/kg iv小鼠。
（4）由于STZ出产时的纯度，个人在实验操作中的误差，如柠檬酸缓冲液配制的PH、比例，实验操作不同如注射时的熟练程度-是否注射到肠腔、注射速度如何，禁食时间长短等，都会有一小点影响，所以在各实验条件下摸出的剂量回有一小点差异。其实，文献报道多在50~70mg/Kg.我当初做的时候用50mg/Kg,效果很不错。因为STZ很贵，所以在我的实验基础上推荐你用50mg/Kg.我看许多外国文献用50mg/Kg也可以了，还有的用45mg/Kg.其实我觉得大家在造模型的时候，一般都是参照手中现有的文献，按照参考计量摸一回，成了的话就直接做了，很少会去摸索一个系列浓度，特别是像STZ这么贵的试剂。
（5）推荐使用50mg/kg的STZ量腹腔注射造模

c****4

很好的东西，学习了·~~

陈****有

动物实验可靠吗！！

l****2

虽然动物实验是一个方法，但动物个体差异太大了，只能做为最初的参考