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[仪器试剂] 有关血涂片染色液问题

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1# 楼主
发表于 2012-8-27 19:31 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式

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请问,平常你们做血涂片用的瑞氏染液是自己配制的还是原装购买的?如果是自己配制的各种成份按什么比例配?怎么做才能使染液染色更好
2# 沙发
发表于 2012-8-27 19:49 | 只看该作者
本帖最后由 mune01 于 2012-8-27 19:55 编辑

1) 瑞氏染液配制: 瑞氏染料 830gm或1g 甲醇(AR) 500ml或600ml ○先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内,用乳棒轻轻敲碎染 料成粉末,再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末,加少许甘油或甲醇溶解研 磨,使染料在乳缸内显“一面镜”光泽,而无染料粉粒沉着。 ○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮,静置片刻,将上层液体倒入一清洁储存瓶 内(最好用甲醇空瓶)再加甲醇研磨,重复数次,至乳钵内染料及甲醇用完为止,摇匀,密封瓶口。 ○存室温暗处,储存愈久,则染料溶解、分解就越好,一般储存3个月以上为佳
2) 缓冲液: ●缓冲液作用: ○染色对氢离子浓度是十分敏感的,据观察pH值的改变,可使蛋白质与染料形成 的化合物重新离解。 ○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定,PBS的pH 一般在6.4~6.8, ○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用,偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起 中和作用,使pH恒定。 缓冲液配制 (pH6.4~6.8,弱酸性):
配方1 : 1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml 1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml H2O(新鲜) 加至1000ml 置室温黑暗处,瓶口密封,防止霉 菌污染,如有污染则应报废。

国产的试剂才几十块钱一套,没有必要自己配给制吧!还是买的好

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3# 板凳
发表于 2012-8-27 20:01 | 只看该作者
我们是买的。
你要自己配也可以呀。
用瑞氏染料和甲醇,按瑞氏染料1g配甲醇600ml的比例配制。甲醇要纯,得AR级以上。
然后装棕色瓶,密封保存,得三个月以上才能用,放越久染出来的效果越好。
可以通过监测RA值来判断染液的是否可以使用,当RA值为1.3±0.1时即可使用

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发表于 2012-8-28 13:59 | 只看该作者
染色效果好坏,对试剂的配置要求固然重要,染色步骤也是很关键的,首先,将血涂片正面朝上至于架子上,然后滴加染液,以铺满全片为好,不易过多,固定30s-60s依据室内温度而定,滴加缓冲液,理论上是缓冲液与染液比例为1:1,实际发现已1:1.5更为适宜,缓冲液稍多然片较鲜艳,我们也叫嫩,若染液多染色时间稍长会把细胞染黑,不易区分胞浆内颗粒以及染色质的粗细及疏松程度。

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发表于 2012-8-31 21:49 | 只看该作者
自己配的,感觉比买的效果好,配一次能用很长时间,以前偷懒用自来水,后来发现还是要用缓冲液好,比例1P2也好,若要颜色鲜艳用稀染液长时好些,推片也很重要,尽量推得薄些。细胞的微细结构都可看见。

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