求助：大鼠微血管内皮培养，多谢多谢各位大侠！！！

j****8

如题。
我培养的是大鼠心脏微血管内皮细胞，用的M199+ECGs培养基，培养了好多次了，但总是失败，万分着急啊，还请大家多多帮助，跪谢了，呜呜。
有以下问题想请教：
1．酶的选择：我用的是胰蛋白酶0.125%、胶原酶I 0.1%和胶原酶II 0.05%。我是3种酶配在一起后再加进去消化的，不知道这样好不好，与依次加入有区别么？
用胰蛋白酶和胶原酶消化时是同时加入还是间隔一段时间分别加入？如果间隔一段时间分别加入，间隔时间为多少？如果同时加入，消化多少时间？
2．国内文献可信度究竟有多高？
3．我用的是corning的塑料瓶子，需要明胶包被培养瓶以利贴壁吗？
4．我用酶消化法培养时，发现很多组织块，想请教下需要用滤网过滤么？过滤后离心转数多少为好？
5．用组织块培养时，各种细胞贴壁的时间及次序是什么？如内皮细胞、心肌细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、血细胞等。
6．组织块培养法细胞纯度高么？听说会有大量成纤维，不知道各位谁用过这种方法呢？

初次培养，十足菜鸟，请高手能否系统回答？多谢！！！多谢！！！