【ZT】细胞培养-有关血清的常见问题

一**意

血清是细胞培养中最重要的元素之一。因此，我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题，供大家参考： 1、保存血清最好的方法是什么？
   我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。但是，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。反复冻融会对血清的品质造成不良影响。 2、如何解冻血清才不会使产品质量受损?    我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。
3、血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?
   由于GIBCO血清在过滤之前，没有经过预老化(pre-aged)处理，所以在解冻过程（包括没有完全解冻）或储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如凝集素、纤维蛋白原和玻连蛋白等）可能会聚集成团，形成絮状沉淀或外观混浊；在运输过程中，由于时间较长，所以往往有少许解冻，因此也可能稍有沉淀，但这些都不影响血清性能。
   若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。
4.何谓热灭活?
   一般是以56℃，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有:溶细胞，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。
5、有必要做热灭活吗?
   实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活的血清，沉淀物的形成会显著增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
   因此我们建议您，若非必须，您可以不做热灭活处理血清。这样，不仅节省您宝贵的时间，更确保血清的质量。只在做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，才推荐做热灭活。我公司也有已经热灭活的血清可供选择。
6、如何减少沉淀物的产生?
   我们建议您在使用血清的时候，注意下列的操作:
  ·解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃ 至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至 37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。
  ·解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生
  ·请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。
  ·血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，则毋须做此步骤。
  ·若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。


edited by pathology on 2005-10-19 at 01:07 AM