请教各位老师关于ＨＰＶ原位杂交的一些技术问题

k****n

我们科里刚买回ＨＰＶ原位杂交试剂盒，因为资金原因没有买原位杂交仪，在关键步骤变性和杂交上用的方法是：

1.变性：加有探针的玻片放入胶带密封的铝制饭盒中，在95℃水浴锅中加热10分钟，希望能使ＤＮＡ双链解开。

2.杂交：加热结束后，立即将饭盒放入盛冰袋的盒子中，然后饭盒的四周和上面均放冰袋，希望是组织马上降温，是ＤＮＡ保持双链的结构，５分钟后将饭盒放入37℃恒温箱中过夜，完成杂交步骤。

可按照试验步骤显色却不尽如人意，结果要不弱阳，要不就干脆阴性。想不出问题出在哪？

变性温度必须是95℃吗，用水浴锅很难保持在一个温度上，高于95℃对组织有影响吗？

p****y

水浴锅温度准确吗？多数国产水浴锅的实际温度和显示温度并不一致，放根温度计测试实际温度才行，而且不同水层温度也不一致。

条件允许的话，最好采用PCR仪来做这一步，高于95度好像也是可以的，但好像只听说过97度，时间上可以略缩短。不作为推荐，:)

k****n

谢谢斑竹