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一、热原的含义与来源:
1、含义
热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。这里所指的“热原”,主要是指细菌性热原,是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物,其次是革兰阳性杆菌类,革兰阳性球菌则较弱,霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。
注入人体的注射剂中含有热原量达1μg/kg就可引起不良反应,发热反应通常在注入1小时后出现,可使人体产生发冷、寒颤、发热、出汗、恶心、呕吐等症状,有时体温可升至40℃以上,严重者甚至昏迷、虚脱,如不及时抢救,可危及生命。该现象称为“热原反应”。
2、来源:
细菌性热原是由细菌在生长、繁殖过程中产生的代谢产物,以及细菌死亡后从细菌尸体中释放出内毒素等混合而成。当细菌存在于药液中,并具备细菌生长繁殖的条件,如水分、适宜细菌生长的温度与酸碱度,又有足够的营养物质,细菌就会快速生长繁殖,就有可能产生热原。大多数细菌和霉菌都能产生热原,热原通常是磷脂多醇与蛋白质结合而成的复合物。磷脂多醇是复合物的活性中心,致热作用最强。其化学组成因菌种不同而有所差异。分子量为5×104~5×105,分子量越大致热作用也越强。
二、热原的基本特征:
1、水溶性:热原能溶于水,其浓缩液往往有乳光。
2、耐热性:热原在60℃加热1小时不受影响,100℃也不会分解,120℃加热4小时能破坏98%左右,在180℃~200℃干热2小时或250℃上干热45分钟,650℃1分钟可彻底破坏。通常采用的注射剂灭菌条件下,热原不能被破坏。
3、滤过性:热原体积小,为1~5nm,能通过一般的除菌滤器,不能截留除去。但用小于1nm孔径的微孔滤膜或超过滤器滤过,则可滤去绝大部分甚至全部热原。
4、不挥发性:热原本身不挥发,溶于水,但可随水蒸气的雾滴夹带入蒸馏水中,故蒸馏水器均设隔膜装置。
5、可吸附性:热原能被活性炭、白陶土、硅藻土等吸附,但属非特异性吸附,药物也会被吸附而损失;同时可被离子交换树脂,尤其阴离子交换树脂所交换而除去。
6、可被强碱、强酸、氧化剂等破坏,故可用强碱或强酸、清洁液来处理带热原的容器。
三、注射剂污染热原的途径:
1、由溶剂带入:
注射用水含热原是注射剂污染热原的主要来源。由于蒸馏器结构不合理,操作不当,容器不洁,放置时间过久等都会污染热原。注射剂的配制,溶剂最好是新鲜制备的溶剂。
2、原辅料带入:
某些原辅料,如中药提取物、蔗糖、含蛋白为主生物制品等,由于细菌容易繁殖而引起热原污染。
3、容器与设备带入:
配制注射剂的容器、用具、管道、滤器等,使用前未彻底清洗、灭菌和除尽热原,均有可能污染热原。
4、制备过程与生产环境带入:
工作人员不按操作规程生产,操作时间过长,环境未净化和气温太高,产品未及时灭菌或灭菌不彻底,都能增加污染机会而产生热原。
5、使用过程带入:
有时注射用输液本身并不含热原,而是输液用器具,如:胶皮管、艾裴氏滴管、针头等未除净热原而污染。
四、除去注射剂中热原的方法:
1、除去药液或溶剂中热原的方法
①吸附法:
常选用优质活性炭(针剂用),常用量为0.1%~0.2%(g/ml)。热原多时,用量可增加至0.5%(g/ml),加热至60℃~80℃,15~30分钟,吸附处理,此外还有脱色、助滤作用;还可吸附药物成分(生物碱、黄酮类等),注意使用量。
也可与硅藻土配合应用,除去热原效果好。
②离子交换法:
由于热原这类大分子上含磷酸根与羧酸根,往往带有负电荷,故易被强碱性阴离子交换树脂所交换,从而除去热原。
③凝胶过滤法:
分子筛滤过法,凝胶物质为滤过介质。适用于药物分子量(生化制剂)明显大于热原分子。
④超滤法:
用特制的微孔滤膜(孔径一般为5~50nm)可除去热原,依靠压力与流速,滤过速度快。要正确掌握超滤操作方法,方能有效。
⑤反渗透法:
三醋酸纤维素膜或聚酰胺膜出去热原。
2、除去容器、用具上热原的方法
①高温法:
凡能耐受高温处理的容器、用具,如注射用玻璃针筒及其他玻璃容器,在洗净后于250℃加热半小时以上,可有效地破坏热原。
②酸碱处理法:
热原可被强酸或强碱所破坏,所以玻璃、瓷制及塑料可用酸液或碱液处理,以重铬酸钾-硫酸清洁液浸泡更为方便。
此外,加强预防。
五、热原的检查方法:
1、家兔致热试验法:药典法。
将一定量的供试品,静脉注入家兔体内,在规定时间内,观察家兔体温升高的情况,以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定的方法。具体工作、环境、家兔的条件及操作方法,应严格按《中国药典》1995年版热原检查项下规定执行。
2、鲎试验法:
本法利用一种低温海洋动物-鲎的血细胞(变形细胞)溶解物(又称鲎试剂)与微量细菌内毒素或热原发生凝胶反应,从而检测微量的内毒素或热原的一种实验技术。该法实质上是一种酶反应,因为鲎血细胞中含有一种高分子量的凝固酶原和一种可凝固蛋白原,前者经内毒素(即热原)激活转化成具有活性的凝固酶,通过酶解作用,使凝固蛋白原转变成凝固蛋白,凝固蛋白又经过交联酶的作用相互聚合形成凝胶。
胶凝的速度与内毒素浓度成正比。已知反应的最适温度为36℃~38℃,最适pH值为6~7.5。
本法虽具有操作简便、迅速、灵敏度高(比兔法高10倍左右)等优点,但若操作不当,会出现一定数量的假阳性反应,且尚未法定,一般多作预测和筛选试验,对革兰阴性杆菌以外的内毒素不敏感。 |
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