技艺切磋：病理科常用科特殊染色法

生**识

文章来源于微信公共帐号：病理人才汇（blrch91360）

一、常用胶原纤维染色方法

1.Van Gieson***和酸性品红法

【染色方法】

（1）中性甲醛固定组织，石蜡切片；

（2）组织切片脱蜡至水；

（3）用Van Gieson液染1～5分钟；

（4）倾去染液，直接用95％乙醇分化和脱水；

（5）无水乙醇脱水，***透明，中性树胶封固。

【结果】胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。

2.Masson氏结缔组织三合染色法

【染色方法】

（1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水；

（2）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻；

（3）Masson氏染色液中5分钟或更长时间；

（4）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻；

（5）5％磷钨酸水溶液2～3分钟，再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗；

（6）投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间；

（7）再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗片刻；

（8）脱水、透明和封固。

【结果】胞浆和神经胶质纤维染红色，胶原纤维染绿色。

二、常用网状纤维染色方法

【染色方法】

（1）石蜡切片、脱蜡至水；

（2）0.25％高锰酸钾液3分钟；

（3）蒸馏水洗2次；

（4）1％草酸漂白即可；

（5）蒸馏水洗2次；

（6）2.5％铁明矾水溶液媒染5～10分钟，蒸馏水洗多次；

（7）二氨氢氧化银浸染1分钟，蒸馏水洗3次；

（8）10％甲醛液还原2分钟，蒸馏水洗3次；

（9）0.2％氯化金液调色1～2分钟，蒸馏水洗3次；

（10）5％硫代硫酸钠固定5分钟；

（11）蒸馏水洗，需要时复染；

（12）水洗、脱水、透明和封固。

【结果】网状维呈黑色，其他组织呈复染的颜色。

三、常用弹力纤维染色方法

显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法

【染色方法】

（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水；

（2）切片入70％乙醇中洗2分钟；

（3）将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.5～2小时；

（4）直接入95％乙醇中分色数秒钟；

（5）浸入蒸馏水洗2分钟；

（6）用丽春红S液滴染切片5分钟；

（7）直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次；

（8）将切片在空气中或冷风干燥；

（9）***透明，中性树胶封固。

【结果】弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。

四、脂肪染色

【染色方法】

（1）冰冻切片厚度8～15μm；

（2）Harris苏木素，染约1分钟；

（3）自来水洗后，用0.5％盐酸乙醇分化，再水洗直至胞核返蓝为止；

（4）蒸馏水洗后移入70％乙醇内浸洗一下；

（5）浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间（如果置于56℃温箱中可适当缩短时间）；

（6）在70％乙醇分化数秒钟；

（7）待切片在空气中稍晾干或用冷风机吹干；

（8）及时用明胶甘油封片。

【结果】脂肪呈橘红色，脂肪酸不着色，胞核淡蓝色。

五、糖原染色

高碘酸－Schiff（Periodic acid Schiff，PAS）染色法

【染色方法】

（1）切片脱蜡至蒸馏水；

（2）浸入高碘酸氧化液中10～20分钟；

（3）蒸馏水洗2次；

（4）Schiff液染色10～30分钟；

（5）流水冲洗5分钟；

（6）用苏木素染细胞核3～5分钟；

（7）在盐酸酒精中分化，自来水洗至细胞核变蓝为止；

（8）脱水、透明和封固。

【结果】糖原和粘蛋白呈紫红色，细胞核染蓝色，霉菌也呈紫红色等。

六、粘液物质（粘多糖）染色

【染色方法】

（1）切片入***，后递次向下直到入水；

（2）3％冰醋酸溶液3分钟；

（3）在奥辛兰溶液中染5分钟；

（4）入3％冰醋酸3分钟，蒸馏水洗（3次）；

（5）用1％过碘酸处理10分钟，蒸馏水洗；

（6）入Schiff液10～30分钟；

（7）流动自来水洗10分钟；

（8）逐级酒精脱水，***透明；

（9）中性树胶封固。

【结果】酸性粘多糖染兰色；中性粘蛋白染品红色；中性和酸性粘蛋白混合物染紫色。

七、横纹肌染色

Mallory磷钨酸－苏木素染色法PTAH

【染色方法】

（1）切片脱蜡至水；

（2）在酸性高锰酸钾液中氧化5～10分钟；

（3）自来水充分洗，蒸馏水洗2次；

（4）用1％草酸液漂白2分钟；

（5）自来水洗，蒸馏水洗2次；

（6）浸入MalloryPTAH液中12～48小时；

（7）直接用95％乙醇分化；

（8）无水乙醇急速脱水，***透明和树胶封固。

【结果】胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维素、横纹肌等均呈蓝色；胶质纤维、网状纤维、软骨基质及骨呈黄色或玫瑰红色；粗弹力纤维有时被染成微紫色；有缺血缺氧早期病变的心肌呈紫蓝色或棕黄色。

八、淀粉染色

【染色方法】

（1）石蜡切片，脱蜡至水；

（2）在1％刚果红水溶液中1小时或更长时间；

（3）投入饱和碳酸锂水溶液中15秒钟；

（4）用80％酒精分化，直至无多余燃料溜下为止；

（5）水洗后用苏木素进行核染色；

（6）等干后进行***透明和树胶封固。

【结果】淀粉样物质呈红色，细胞核呈兰色。

九、幽门螺杆菌染色

【染色方法】

（1）中性甲醛固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水；

（2）0.2mol／L醋酸缓冲液洗2次；

（3）将切片置入1％硝酸银液内1小时左右（温箱56℃）；

（4）直接把切片取出，立即浸入显影液内2～3分钟；

（5）将切片浸入56℃蒸馏水中洗1～2分钟；

（6）蒸馏水洗1次；

（7）无水乙醇脱水，***透明和中性树胶封固。

【结果】胃幽门弯曲菌呈棕黑色或黑色，背景呈淡黄色。

十、尼氏小体

【染色方法】

（1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水；

（2）用1％甲苯胺蓝水溶液置于50～60℃温箱内浸染20～40分钟；

（3）蒸馏水稍洗；

（4）95％乙醇迅速分化；

（5）无水乙醇脱水，二甲笨透明，中性树胶封固。

【结果】尼氏小体紫蓝色，胞核棕红色。

十一、含铁血黄素染色法

【染色方法】

（1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水；

（2）投入新鲜配置的20％盐酸和10％亚铁***等量混合液（用前过滤）中30分钟，必要时可延长时间；

（3）蒸馏水洗；

（4）在0.5％的碱性品红（溶剂为50％酒精）进行1分钟对比染色；

（5）在95％酒精中分化后晾干，透明，封固。

【结果】含铁血黄素呈蓝色，血棕色素呈红色。

十二、黑色素染色法

【染色方法】

（1）石蜡切片，脱蜡至水；

（2）投入硝酸银染色液中，并置于暗处12～18小时；

（3）蒸馏水洗2分钟；

（4）以0.2％氯化金水溶液增色5－10分钟；

（5）蒸馏水洗；

（6）投入5％硫代硫酸钠水溶液2分钟；

（7）自来水洗；

（8）如需复染，可用苏木素－伊红染色法；

（9）酒精脱水，***透明，树胶封固。

【结果】黑色素呈黑色。