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[实习交流] 细胞培养问题答疑

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发表于 2018-6-25 13:07 | 显示全部楼层 |阅读模式

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细胞培养问题答疑
1、悬浮性细胞应该怎么样进行传代处理?
一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,可将培养瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部分含细胞培养液至另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。

2、原代细胞与细胞系有什么区别?
细胞培养物来源于原代外植体或分散的细胞悬液。通常在这样的培养物中细胞增殖形成汇合地单层细胞或密集地细胞悬液。根据传统定义,第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞,这类细胞生命周期有限,在有限的生命周期内需掌握好细胞最大的生长空间,以保持细胞群中基因型和表型的一致性。
细胞系是不断生长,分化的细胞群,因其经过遗传改造,致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。实际上,连续细胞系可以用大量次培养基培养,随着代数的增加细胞的基因型和表型都有可能发生改变。需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。

3、倍增和代数有什么区别?
倍增是培养物中细胞总数加倍,通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出,传代培养过程的次数,传代培养的目的是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。

4、需要多久才可以更换一次培养基?
一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
注意:第一次植入冻存的细胞后,在6-16小时内更换培养基,以去除残留的二甲基亚枫和死亡细胞。
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5、可不可以使用与原先培养条件不同的培养基?
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基, 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。

6、可不可以使用与原先培养条件不同的胎牛血清种类?
不能。胎牛血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以胎牛血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,胎牛血清使用错误常会造成细胞无法存活。

7、细胞冷冻培养基的成份有哪些?
动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基(可增加血清含量至20%)均匀混合之。注意:由于DMSO 稀释时会放出大量热能, 故不可将DMSO 直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成。

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