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[专业资源] 发现成人特发性膜性肾病致病的新抗原

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发表于 2015-3-31 14:54 | 显示全部楼层 |阅读模式

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    特发性膜性肾病(IMN)是导致成人肾病综合征(NS)的常见原因。2009年人们发现磷脂酶A2的1型受体(PLA2R1)是参与成人IMN致病主要抗体,70%IMN患者体内具有针对PLA2R1的循环抗体。如今有部分学者认为IMN是一种自身免疫性疾病。其余30%IMN的患者中可能存在其它导致疾病的内源性肾小球抗原,但抗原的靶目标还未知。
    为了确定除PLA2R1之外针对肾小球抗原的循环抗体,Tomas等进行了一项研究,发现15例IMN患者的血清中存在针对1型血小板反应蛋白7A域(THSD7A)而非PLA2R1的循环抗体,并且证实THSD7A是参与成人IMN发病的第二个抗原。研究结果于2104年11月发表在NEJM杂志上。
    研究者从IMN患者、其它肾小球疾病患者和健康对照者中筛选血清标本。他们使用ELISA和免疫印迹法测定PLA2R1抗体水平,使用免疫印迹法测定针对人自身肾小球蛋白的抗体。然后他们纯化一种推测的新抗原,通过质谱分析识别这种蛋白,并通过免疫沉淀和免疫组化分析重组蛋白的表达来验证这一结果。
    结果发现15份来自PLA2R1抗体阴性的IMN患者的血清标本识别一种分子量大小为250kD的肾小球蛋白。来自74例PLA2R1抗体阳性的IMN患者,76例其它肾小球疾病患者和44例健康对照者的血清标本中则没有一份血清标本识别这一抗原。
    接着研究者使用了两种***的方法来确认这个抗原。第一种方法:使用凝胶电泳和免疫印迹分析肾小球的蛋白质,在250kD,225kD和200kD分子量处发现三条不同的条带。第二种方法:肾小球的蛋白质部分地被胰蛋白酶水解,所有对免疫印迹信号有应答的凝胶区域被切除下来进行质谱分析,产生一系列候选的蛋白抗原。通过商品化的抗体和转染至人胚肾(HEK)293细胞中对候选抗原进行特异性检测,最终确认这一感兴趣的蛋白是1型血小板反应蛋白7A域(THSD7A)。
    为了确定抗THSD7A抗体的IgG亚型,研究者使用了针对IgG1-IgG4的第二抗体。发现虽然其它IgG亚型在大多数血清样本中有微弱表达,但IgG4才是抗THSD7A抗体的主要亚型。在血清THSD7A阳性的IMN患者的肾活检样本中也发现THSD7A与IgG4共定位。
    来自健康对照者肾活检标本的抗THSD7A抗体的免疫荧光染色显示THSD7A主要与Nephrin共定位,而不与肾小球基底膜的标志IV型胶原和纤联蛋白(Fibronectin)共定位,也不与内皮细胞的标志物CD34共定位。提示THSD7A表达于足细胞足突而不是肾小球基底膜。
    由于抗THSD7A抗体与抗PLA2R1抗体存在明显的互相排斥性,研究者比较了其各自阳性患者的临床特点。发现两组患者在年龄,尿蛋白水平,血清白蛋白,血肌酐和诊断后6个月内对免疫抑制治疗的反应之间无显著性差异。但是抗THSD7A抗体阳性组的女性患者更多(65% vs 27%)。同时通过临床观察发现抗THSD7A抗体的水平与疾病活动度之间有一定关系。
    虽然THSD7A这一新识别的抗原明显与PLA2R1不同,但也具有与PLA2R1相似的一些结构和生化特性,如:均表达于足细胞膜上,含有一个由许多重复的二硫键所组成的大型胞内区域和N-糖基化区域(但糖基化程度较PLA2R1轻);针对THSD7A和PLA2R1的自身抗体均是IgG4亚型,并且仅在非还原条件下与血清起反应识别它们的靶抗原。
    总之,该研究在PLA2R1抗体阴性的IMN患者血清中发现了分子量大小为250kD的肾小球蛋白-THSD7A,以及针对THSD7A而非PLA2R1的循环抗体。结果提示THSD7A是参与成人IMN发病的第二个抗原,抗THSD7A抗体阳性的患者代表了明显不同的一个IMN患者亚组。这将有助于我们进一步理解MN的发病机制,并进一步将IMN从继发性MN中区别出来。

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