手足口病的实验室检查

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手足口病的实验室诊断
1.实验室检查

    周围血相中的细胞总数一般正常或偏高，分类淋巴细胞较高，中性粒细胞较低。有中枢神经系统合并症时，脑脊液细胞数可增多，蛋白升高。

2.病原学检查

    肠道病毒在自然界广泛存在且种类繁多，一病多原、一原多症是肠道病毒感染的重要特征。感染了柯萨奇病毒、埃可病毒和新肠道病毒的任何一个血清型，其结果可以是没有症状，也可以是致死性感染，因而应对血清诊断及病原诊断结果作严格评价，以确立病毒与疾病的病原学关系。

    确认的一般原则为：①病毒分离阳性率远高于对照人群；②病程中有相应的抗体变化并排除其它病毒感染；③病变组织中分离出高价病毒。

  3.常用的分离方法有细胞接种和乳鼠接种。
    1990年以前，许多毒株都采用Vero细胞、GMK细胞分离，1998年人们开始用人肺系细胞(MRC—5)分离CoxAl6等毒株，其敏感性好且接种病毒后出现细胞病变较快。人源细胞如w1—38、EK、横纹肌瘤细胞(RD)也都可用于病毒分离。RD细胞支持大多数柯萨奇A组病毒**，但一般要经过2次以上传代才出现明显病变，若在使用RD细胞分离的同时再增加1株L20B或Hep—2细胞，可提高肠道病毒的分离率。为提高细胞对肠道病毒的敏感性，还可在细胞接种前用50μg／ml的5—碘脱氧尿嘧啶处理3天。对一些不能在细胞上生长的病毒，可用乳鼠接种分离病毒。埃可病毒一般不引起乳鼠发病，埃可病毒多由脑脊液分离，粪便中不易检出。肠道病毒型特异性鉴定主要靠血清中和实验，但是有些毒株的中和作用不稳定，仍需由单价血清来鉴定，另一要注意的是病毒颗粒的集聚会影响中和效果，如EV71的中和实验就需要使用单个分散的病毒。

    分子生物学检查近年来，PCR技术已成为诊断肠道病毒感染最常用的一种方法。PCR测序技术则可用于肠道病毒分型。日本学者还提出了一种鉴别CoxAl6与EV71的方法，由病毒分离、RT-PCR扩增和限制性内切酶酶切3步组成。对需鉴定的毒株，逆转录和扩增均由引物E31和E33分别进行，CoxA6、CoxAl6和EV71是仅有的可由2／E33引导而不可由2／E31引导的3种病毒，由此区别于其它肠道病毒；扩增后的产物再分别经Taq I、EcoT22 II酶切，CoxAl6被Taq I切成3段、被EcoT22 II切成1段，而EV 71不被这两种酶所切，因此迅速地鉴别CoxA16与EV71。此外，荧光斑点杂交法也常于肠道病毒分型检测。手足口病抗体检测的最常用方法目前仍是中和实验，该法精确且具有型特异性。

  4.病毒学检测注意事项

    标本采集  肠道病毒可通过消化道感染，有的还可借助呼吸传播。当人体感染了肠道病毒后，经过淋巴组织、咽喉和肠道内初次和继续繁殖后，便发生病毒血症，进而病毒在网状内皮细胞繁殖，最后侵犯靶器官(脊髓、脑、脑膜、心肌、皮肤等)。病人在出现临床症状前数天，其血液、咽喉和粪便中均存在病毒。咽喉排毒为1—2周，粪便可更长些。但为了提高病毒检测的阳性率，越早采集标本越好。同时采集二种以上标本，可提高阳性率。在标本采集之前，为了预防细菌或其他病毒感染，一切用具均须高压灭菌。标本采集后，贴好标签，置***送至实验室。

    1．粪便  一般采集4—8 g，电镜检查必须在20 g以上。不必加任何保护液，装于小瓶送检或冷冻保存。

    2．直肠拭子  如粪便标本不能采集，通常可用直肠拭子代替，但阳性率大大降低。

    3．喉洗液  在取标本之前，让病人先咳嗽声，头向后仰，将pH7.2牛肉汤倒入口腔内，在咽喉部反复洗漱几分钟，把漱口液吐入消毒平皿，装于消毒试管送至实验室。

    4．疱疹液  选择有混浊疱疹，先进行皮肤消毒，然后用注射针头抽取疱疹液，置于消毒试管，保持低温冰箱待检。

    5．脑脊液  在无菌条件下采集,置于消毒试管中，立即送检或冻存。

    6．尸体组织  尸检材料应尽可能立即采集，并应备有几套消毒器械。收集各种组织时，应按顺序，避免胃肠内容物的污染。体腔外的组织(如中枢神经组织、腮腺和淋巴结)，应在体腔打开之前采集；胸腔内组织应在腹腔打开前采集；腹腔内组织应在肠腔打开前采集。每个组织分别使用一套消毒器械，并分别置于适宜的消毒器皿内，不必加任何保护液，立刻送到实验室。

    7．血液标本  如做抗体测定，必须采集2份血清标本。第1份(急性期)在发病时尽早采集，第2份在发病后1个月左右采集。每次采集时，必须空腹，在无菌条件下抽取5m1血液，置于消毒试管。在室温放置2h，待凝固后分离血清。

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好东西，学习了

吴***h

好东西，学习了，谢谢