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[血液与体液] 谁告诉我怎么检查AFP!!!

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1# 楼主
发表于 2007-12-1 21:05 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式

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:'( :'(谁告诉我怎么检查AFP!!!
AFP的检查步骤
2# 沙发
发表于 2007-12-2 03:52 | 只看该作者
检测AFP的常用方法有放射免疫法(RIA)、化学发光法(CLIA)、电化学发光法(ECLIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)和金标记免疫渗滤法等。以ELISA法最为常用。这里说一说ELISA法:
一、原理:采用ELISA双抗体夹心法。用抗AFP抗体包被微孔板,分别将待测样本、标准品及阳性、阴性对照加至包被孔中,反应后加入酶结合物(HRP-抗AFP单克隆抗体),使特异性地形成固相抗AFP抗体-AFP-酶标抗AFP抗体复合物,再加入酶底物/色原呈色。呈色程度与测定范围内的样本中AFP浓度成正比。
二、试剂:购买专用商品试剂盒。
三、操作步骤:
1、自试剂盒中取出已包被抗AFP抗体的微孔反应板条,平衡至室温(18~25度),配制相关试剂。
2、将待测血清用样本稀释液作1:10稀释,每孔加100ul。37度1h 后洗涤5次。
3、将AFP标准品稀释成3、6、12、25、50、100ng/ml,分别加至微孔中,每孔100ul。设置空白
对照孔、阳性对照孔、阴性对照孔。与待测血清同法超作。
4、各孔加酶(HRP)标记抗AFP 抗体100ul(空白孔不加),37度1h 后洗涤5次。
5、甩干孔内液体后加入酶底物/色原溶液,每孔100ul,37度避光反应15min,呈色 。
6、每孔加2mol/L H2SO450ul 终止反应。用酶联仪在相关波长测定吸光度。
四、计算:
以标准品的浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的吸光度值由标准曲线查出相应的浓度;或用标准品的浓度与吸光度值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的吸光度值代入方程式,计算出样品浓度。通常由酶联仪直接打印报告。
五、参考区间:(ng/ml)
1、出生时:60000~120000
2、0~2个月:25~1000
3、2~6个月:25~100
4、6个月:20
5、成人:<20
6、妊娠3个月:18~113
7、妊娠4~6个月:160~550
8、妊娠7~9个月:100~400

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3# 板凳
发表于 2007-12-2 21:13 | 只看该作者
牛X
4
发表于 2007-12-3 15:41 | 只看该作者
金标记免疫渗滤法针对单个病人比较经济实惠,可以自己买来在家里使用,前提是你能自己抽血,分离血清。其实抽完血放试管里静置3-4个小时就够了。下来按照说明书,很简单的。
5
发表于 2007-12-3 21:42 | 只看该作者
用电化学发光的方法也比较简单,我们科室就是用罗氏点法光生化仪,利用三联吡啶釕的激发光的循环测定,10min左右就能出结果,就是成本有点高,量大的话还是比较划算的。
6
发表于 2007-12-5 11:22 | 只看该作者
太谢谢了
7
发表于 2007-12-5 16:32 | 只看该作者
学习了!
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