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标题: 谁告诉我怎么检查ＡＦＰ！！！ [打印本页]

作者: 2982410 时间: 2007-12-1 21:05
标题: 谁告诉我怎么检查ＡＦＰ！！！
:'( :'(谁告诉我怎么检查ＡＦＰ！！！
ＡＦＰ的检查步骤

作者: cxf3728 时间: 2007-12-2 03:52
检测AFP的常用方法有放射免疫法（RIA）、化学发光法（CLIA）、电化学发光法（ECLIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）和金标记免疫渗滤法等。以ELISA法最为常用。这里说一说ELISA法：
一、原理：采用ELISA双抗体夹心法。用抗AFP抗体包被微孔板，分别将待测样本、标准品及阳性、阴性对照加至包被孔中，反应后加入酶结合物（HRP-抗AFP单克隆抗体），使特异性地形成固相抗AFP抗体-AFP-酶标抗AFP抗体复合物，再加入酶底物/色原呈色。呈色程度与测定范围内的样本中AFP浓度成正比。
二、试剂：购买专用商品试剂盒。
三、操作步骤：
1、自试剂盒中取出已包被抗AFP抗体的微孔反应板条，平衡至室温（18~25度），配制相关试剂。
2、将待测血清用样本稀释液作1：10稀释，每孔加100ul。37度1h 后洗涤5次。
3、将AFP标准品稀释成3、6、12、25、50、100ng/ml，分别加至微孔中，每孔100ul。设置空白
对照孔、阳性对照孔、阴性对照孔。与待测血清同法超作。
4、各孔加酶（HRP）标记抗AFP 抗体100ul（空白孔不加），37度1h 后洗涤5次。
5、甩干孔内液体后加入酶底物/色原溶液，每孔100ul，37度避光反应15min，呈色。
6、每孔加2mol/L H2SO450ul 终止反应。用酶联仪在相关波长测定吸光度。
四、计算：
以标准品的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的吸光度值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准品的浓度与吸光度值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的吸光度值代入方程式，计算出样品浓度。通常由酶联仪直接打印报告。
五、参考区间：（ng/ml）
1、出生时：60000~120000
2、0~2个月：25~1000
3、2~6个月：25~100
4、6个月：20
5、成人：<20
6、妊娠3个月：18~113
7、妊娠4~6个月：160~550
8、妊娠7~9个月：100~400

作者: honey3210 时间: 2007-12-2 21:13
牛X

作者: zhangwenhao 时间: 2007-12-3 15:41
金标记免疫渗滤法针对单个病人比较经济实惠，可以自己买来在家里使用，前提是你能自己抽血，分离血清。其实抽完血放试管里静置3－4个小时就够了。下来按照说明书，很简单的。

作者: shiyuziyi 时间: 2007-12-3 21:42
用电化学发光的方法也比较简单，我们科室就是用罗氏点法光生化仪，利用三联吡啶釕的激发光的循环测定，10min左右就能出结果，就是成本有点高，量大的话还是比较划算的。

作者: 2982410 时间: 2007-12-5 11:22
太谢谢了

作者: lxp183 时间: 2007-12-5 16:32
学习了！

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