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溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionized formamide)
直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。
磷酸缓冲液(phosphate buffer)
按照下表所给定的体积,混合1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
1mol/L 磷酸二氢钠(ml) 1mol/L 磷酸氢二钠(ml) 最终pH值
877
850
815
775
735
685
625
565
510
450
390
330
280 123
150
185
225
265
315
375
435
490
550
610
670
720 6.0
6.1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9
7.0
7.1
7.2
TE(用于悬浮和贮存DNA)
成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris-HCl
1mmol/L EDTA
水 1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)
200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
98.8ml
Tris缓冲液(Tris-HCl buffer)
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。
浓盐酸的体积(ml) pH
8.6
14
21
28.5
38
46
56
66
71.3
76 9.0
8.8
8.6
8.4
8.2
8.0
7.8
7.6
7.4
7.2
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱
1mol/L 乙酸
100 mmol/L EDTA
水 242g
57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)
200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
补足1L
5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐
10 mmol/L EDTA
水 54g
27.5g 硼酸
20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
补足1L
染料
1%溴酚蓝(bromophenol blue)
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%***青FF(xylene cyanole FF)
溶解1g***青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gel loading solutions)
6×碱性凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠
6 mmol/L EDTA
18%聚蔗糖(400型)
0.15%溴甲酚绿
0.25%***青FF
水 300ul 10N 氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
1.8g
15mg
25mg
补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝
0.15%***青FF
5 mmol/L EDTA
15%聚蔗糖(400型)
水 1.5ml 1%溴酚蓝
1.5ml 1%***青FF
100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
1.5g
补足到10ml
6×溴酚蓝/***青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.25%溴酚蓝
0.25%***青FF
15%聚蔗糖(400型)
水 2.5ml 1%溴酚蓝
2.5ml 1%***青FF
1.5g
补足到10ml
6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝
0.15%***青FF
5 mmol/L EDTA
50%甘油
水 1.5ml 1%溴酚蓝
1.5ml 1%***青FF
100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
3ml
3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝
0.15%***青FF
5 mmol/L EDTA
40%聚蔗糖
水 1.5ml 1%溴酚蓝
1.5ml 1%***青FF
100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
4g
补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.2%溴酚蓝
0.2%***青FF
200 mmol/L EDTA
0.1%SDS
50%甘油
水 20mg
20mg
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
100ul 10% SDS
5ml
补足到10ml
三.常用培养基
LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
氯化钠 10g
如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
氯化钠 0.5g
1 mol/L 氯化钾 2.5ml
用水补足体积到1L。分成100ml的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。
TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨 12g
酵母提取物 24g
甘油 4ml
各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。
2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨 16g
酵母提取物 10g
氯化钠 4ml
如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨 20g
酵母提取物 10g
葡萄糖 20g
用水补足体积为1L后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
四.常用抗生素
氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)
溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素(streptomycin)(50mg/ml)
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素(tetracyyline)(10mg/ml)
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 |
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