慢性乙型肝炎免疫治疗方法

翟*丹

树突状细胞（Dendritic Cells , DC）是体内重要的一类抗原呈递细胞（Antigen－presenting Cells , APC），其共同的生物学特性是细胞表面有许多树枝状突起，胞内具有丰富的线粒体，与巨噬细胞、B细胞抗原呈递功能不同， 只有DC能够**初始型T细胞（Na?ve T cells）使之分化、激活，后者影响机体的细胞和体液免疫系统，因此，DC被认为是机体免疫反应的始动者。乙型病毒性肝炎是我国最重要的传染病之一，已有多项对DC生物学特征、与其它免疫细胞关系研究，临床医生评价DC在乙型肝炎病人的功能、数量及临床意义，并有学者尝试应用体外激活的特异性乙肝病毒的DC回输治疗乙型肝炎。

乙肝病毒的清除依赖于强大的、多克隆的、特异的CD8＋细胞毒性T细胞和CD4＋T辅助细胞来对抗病毒表面抗原、核心抗原和P蛋白抗原。而且，效应T细胞通过分泌淋巴因子能够中止病毒**而不损伤感染的肝脏细胞，这些效应T细胞需要APC用提呈的抗原、MHC分子、共**分子共同激活，DC表达MHCⅠ类和Ⅱ类分子，并能够在摄取抗原后上调细胞膜上的共**分子（CD40 、CD80 、CD86），只有DC能直接使初始型T细胞活化，促进Th1和Th2细胞分化，增强CTL细胞功能。有研究认为长期慢性的乙肝感染与不足的CTL细胞22以及TH细胞分化比例不同有关，而这些情况均可能与DC功能损伤有关。Susanne Beckebaum等人对慢性乙肝患者新鲜外周血中的PDC1与PDC2及培养后成熟DC1研究中发现：PDC2比例明显升高，PDC1比例明显下降，PDC1/PDC2比值不足正常人的1/2，经细胞因子诱导成熟的DC1表面共**分子CD80与CD86表达低于正常对照人群（P<0.006），分泌IL－12水平下降，经MLR后IL－10分泌量与正常人没有差别，但是INF－γ产量减少，并发现有病人出现在培养DC细胞中出现乙肝病毒活动征象，用半巢式PCR方法发现其中2例患者于DC1中有乙肝病毒cccDNA存在，并有明显病毒**存在24。研究还发现病毒**患者的IL－12水平最低、INF－γ产量和CD80表达也最少，而在培养液中没有病毒颗粒的患者中（7/13），IL－12和 INF－γ产生较多，CD80表达最高。有人利用非病毒性肝病（如酒精性肝硬化、原发性胆汁性肝硬化、自免性肝炎等）患者外周血培养评价DC功能表明这些患者DC细胞有正常的共**能力。这也说明慢性乙肝患者DC细胞功能减低并非因为肝病继发引起而是与乙肝病毒感染有关。IL12分泌减少与TH1不足与病毒持续存在有关，PBMC可能成为乙肝病毒储存库，病毒基因可以嵌入宿主基因。就像对HIV、麻疹病毒、单纯疱疹病毒等研究中发现，DC不仅是宿主抵抗病毒的细胞，还可以作为载体使病毒传播和逃避免疫损伤。
Yukihiro Shimizu等人对乙肝病毒转基因小鼠研究DC细胞治疗前景，这种小鼠对乙肝病毒有免疫耐受，将其DC体外培养用HBsAg**后回输小鼠的尾静脉中，发现：1、这种小鼠在体外培养的DC可产生正常对抗乙肝病毒的能力，并且这种激活的DC在小鼠体内可以激活抗原特异性的CTL细胞，说明这种小鼠CTL前体细胞是正常的。2、只需要100个被细胞因子激活的DC输入这种小鼠体内就可以打破小鼠对乙肝病毒的免疫耐受，且这些DC表达正常水平的粘附分子、受体和活动标志，表现出正常的抗原提呈和呈递作用。3、这种小鼠的T细胞可能是忽略乙肝表面抗原的存在，而不是T细胞耗竭，且这种小鼠DC无论在形态上还是功能上均正常，且在激活后可以呈递MHCⅠ类分子与乙肝病毒抗原的复合体。CTL细胞需要信号才能够被激活，试验中这种信号来自体外激活的DC细胞，即使应用DNA疫苗之后，这种小鼠体内DC细胞也不存在这种信号，这可能与共**分子表达充分与否有关，这类分子不仅有帮助抗原提呈作用，也能通过上调CTL的BCLxL蛋白表达使CTL细胞存活。4、自体激活的DC可能有免疫激活作用。但试验中并未发现治疗的小鼠出现病毒清除反应和HBV－DNA及乙肝抗原蛋白表达水平下降，这可能与CTL细胞数量不足、作用时间不长、不能运动到肝脏、活性低原因有关。因为病毒清除依赖于长期CTL反应，并且脾的CTL数量应该大于1％，本次试验的CTL细胞升高仅为一过性的，脾内CTL细胞比例仅占T细胞总数的0.01％-0.005％，可能更多的CTL和更长的作用时间会引起肝炎发生，清除病毒。

有人最近将携带HBV c基因的病毒与小鼠DC一起培养后，用PCR发现DC内有c基因活动，并用western blot方法发现DC表达HBV c基因，这种转基因DC正常表达CD80分子和MHCⅡ类分子，在体内可引起乙肝核心抗原特异的CTL和TH1细胞反应。

国内学者李用国等人于2001年8月-2002年8月对重庆医科大学附属第二医院19名慢性乙肝患者进行研究，作者抽取患者自身血液60毫升，提取PBMC培养DC成熟，再应用HBsAg**后回输患者皮下，每两周1次，共治疗两次，研究检测了患者的肝脏功能、乙肝病毒抗原抗体系统、HBV－DNA，发现在11名患者出现不同程度的病毒应答，7例出现生化应答，其治疗方法与其它抗病毒药物疗效相似，其中2例应用拉米呋定的患者均有应答，作者认为这种治疗可能与抗病毒药物联合使用会提高疗效，在评价疗效好坏指标中，作者认为DC培养状态很重要，在培养中死亡细胞<10％的应答较好。

根据以上研究提示我们，乙肝病毒的治疗可能因为DC功能和作用的进一步认识而得到快速发展，目前虽然已经有学者应用特异性DC治疗CHB患者，但是其安全性和可靠性还需要进一步的评价，而对DC的基础研究和动物实验还应该进一步开展，总之，对乙型肝炎的免疫治疗将会成为重要的临床治疗方法，DC在这中治疗策略中将起到至关重要的作用。